货号:UPLC-MS-4616 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4615 | 规格:50T/48S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 55 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
粉剂×2 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
粉剂×2 瓶 |
4℃保存 |
标准液 |
液体 3 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前配制,加入 7.5 mL 蒸馏水充分溶解,试剂一变黑后则不能使用;
2、 试剂二:临用前配制,加入 375 μL 冰醋酸,加入 12 mL 蒸馏水充分溶解;溶解后 4℃保存一周;
3、 标准液:1 μmol/mL Fe3+标准液。临用前稀释 8 倍即 0.125 μmol/mL 的标准溶液进行实验,现用现配。
铁是人体必须的微量元素之一,它是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其他酶系统的主要成分,帮助氧的运输,促进脂肪氧化。缺乏铁元素容易造成贫血、代谢纷乱,并影响机体的免疫功能。
亚硫酸钠还原Fe3+生成Fe2+,Fe2+进一步与2, 2’-联吡啶显色,在520nm处有吸收峰,测定该波长吸光度即可计算铁含量。
最低检出限:0.00009449 μmol/mL
线性范围:0.0039-0.25 μmol/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、氯仿、冰和蒸馏水。
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。4000g 4℃离心 10 分钟,取上清。
加入试剂(μL) |
空白管 |
测定管 |
标准管 |
蒸馏水 |
400 |
- |
- |
0.125μmol/mL标准液 |
- |
- |
400 |
样本 |
- |
400 |
- |
试剂一 |
200 |
200 |
200 |
试剂二 |
400 |
400 |
400 |
混匀后盖紧,置于沸水浴5min,自来水冷却;加入200μL氯仿(自备),充分震荡混匀;室温10000rpm, 离心10min,小心吸取上层液800μL,加入1mL玻璃比色皿,于520nm立即测定吸光度,分别记为A空白管、A 测定管、A标准管,计算ΔA标准=A标准管-A空白管,ΔA测定=A测定管-A空白管。 |
1.按组织质量计算
组织铁含量(μg/g 质量)=(C标准液×ΔA测定÷ΔA标准)×V提取×55.845÷W=6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷W
2.按组织蛋白浓度计算
组织铁含量(μg/mg prot)=(C标准液×ΔA测定÷ΔA标准)×V提取×55.845÷(Cpr×V提取)=6.98×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
C标准液:0.125μmol/mL Fe3+标准液;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V提取:提取液体积,1mL;55.845: Fe的相对分子质量,55.845μg/μmol。
1、 当ΔA大于0.9时,建议将样本用提取液稀释后进行测定。
2、 试剂一溶解变黑后则不能使用;试剂二有毒性,做好防护措施。
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