上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4425 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4424 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 30 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂一 |
液体 12 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂二 |
液体 12 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂三 |
液体 35 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、标准品:10 μmol/mL 酚标准液,临用前蒸馏水稀释至 0.625μmol/mL 备用(可以吸取 20μL 10 μmol/mL 酚标准液和 300μL 蒸馏水混合备用),稀释后的标准液 2-8℃保存一周。
ACP 在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP 常用于前列腺癌的辅助诊断。
在酸性环境中,ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚,苯酚与 4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通过测定 510nm 吸光度增加速率,来计算ACP 活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
组织样本称取约 0.1g 组织,加提取液 1mL 充分研磨,4℃,10000rpm 离心 10min,取上清液待测。血清(血浆):血液可直接用于测定,如果浓度高的话,用提取液稀释。
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长到 510nm,蒸馏水调零。
2、试剂一置于 37℃水浴中预热 30min 以上。
3、操作表:
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
空白管 |
标准管 |
蒸馏水 |
- |
- |
100 |
- |
标准品 |
- |
- |
- |
100 |
上清液 |
100 |
- |
- |
- |
试剂一 |
200 |
200 |
200 |
200 |
试剂二 |
200 |
200 |
200 |
200 |
混匀后置于 37℃中保温 15min |
||||
试剂三 |
600 |
600 |
600 |
600 |
上清液 |
- |
100 |
- |
- |
混匀后于 510 nm 测定吸光度,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 空白管、A 标准管。空白管和标准管只需做 1-2 次。 |
1、按蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1μmol 酚为一个酶活力单位。
ACP 酶活 (U/mg prot)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样]÷(Cpr×V 样)÷T=0.0417×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生 1μmol 酚为一个酶活力单位。
ACP 酶活 (U/g 质量)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样] ÷(W÷V 提取×V 样)÷T=0.0417×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
3、按血液体积计算
活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚为一个酶活力单位。
ACP 酶活 (U/mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样] ÷V 样÷T=0.0417×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准品:标准品浓度,0.625μmol/mL;V 样:加入反应体系中上清液体积,0.1mL;Cpr:样本蛋白浓度,
mg/mL;T:反应时间,15min;V 提取:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g。
1、试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、加入试剂三后必须立即混匀,否则显色不完全。
4、ACP 不稳定,尤其在 37℃和 pH 大于 7 的条件下活力丧失快,因此酸性磷酸酶样本一般需当天准备;血清样本中,每毫升血清中加入 10mg 柠檬酸氢二钠或者 5mg 硫酸氢钠,使 pH 降至 6.5 以下,或 5mL 血清加入 30% 醋酸溶液 2~3 滴,置于 4℃可保存 1 周。
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