货号:UPLC-MS-4427 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4426 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 60 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 5 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 5 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 15 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准液 |
液体 1 mL×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、标准液:10 μmol/mL 酚标准液,临用前蒸馏水稀释至 2.5μmol/mL 备用。
AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。
在碱性环境中,AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚;酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物, 在510nm有特征光吸收;通过测定510nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
称取约 0.1g 组织,加提取液 1mL 充分研磨,4℃、10000rpm 离心 10min,取上清液待测。血液可直接用于测定,或者适当稀释后用于测定。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到510nm,蒸馏水调零。
2、 操作表:
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
空白管 |
标准管 |
蒸馏水 |
- |
- |
4 |
- |
标准品 |
- |
- |
- |
4 |
上清液 |
4 |
- |
- |
- |
试剂一 |
40 |
40 |
40 |
40 |
试剂二 |
40 |
40 |
40 |
40 |
混匀后置于37℃水浴中保温15min |
||||
试剂三 |
120 |
120 |
120 |
120 |
上清液 |
- |
4 |
- |
- |
混匀后于510nm测定吸光度,分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。 |
1、按样本蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP 酶活(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(Cpr×V样)÷T=0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生1 μmol酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP 酶活(U/g 质量)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(W÷V提取×V样)÷T=0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3、按液体体积计算
活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP 酶活(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷V样÷T=0.167×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准品:标准品浓度,2.5μmol/mL;V样:加入反应体系中上清液体积,0.004mL;T:反应时间,15min;V提取:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL。
1、 试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、 试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、 加入试剂三后必须立即混匀,否则显色不完全。
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