总糖含量检测试剂盒-总糖检测试剂盒-上海液质




上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购



货号:UPLC-MS-4109 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4108 规格:50T/48S 可见分光光度法


产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。


试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 50 mL×1

2-8℃保存

试剂二

液体 50 mL×1

2-8℃保存

试剂三

液体 13 mL×1

2-8℃保存

标准品

粉剂×1

2-8℃保存

溶液的配制:1.标准品:10 mg 无水葡萄糖。临用前加 1 mL 蒸馏水溶解为 10 mg/mL 的葡萄糖标准品备用,2-8℃保存两周。


产品说明:

     糖类物质是构成植物体的重要成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖主要指具有还原性的葡萄糖,果糖,戊糖,乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖,麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。总糖酸水解为还原糖,还原糖在碱性条件下与DNS试剂共热后被还原成氨基化合物,在碱性溶液中呈红棕色,还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系,以此测定样本中的总糖含量。

技术指标:

最低检出限:0.0444 mg/mL

线性范围:0.1-1 mg/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。


操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、组织样本的处理:称取约 0.1g 样本于 10mLEP 管中,加入 1mL 试剂一,1.5mL 蒸馏水,研磨匀浆,沸水 30min,加入 1mL 试剂二,涡旋混匀,用蒸馏水定容至 10mL,8000g,25℃离心 10min,取上清液待测。意稀释,见注意事项

2、血清(浆)、液体样本的处理:取 0.1mL 血清(浆) 1mLEP 管中,加入 0.1mL 试剂一,0.15mL 蒸馏水, 匀浆,沸水浴 30min,加入 0.1mL 试剂二,涡旋混匀,用蒸馏水定容至 1mL,8000g,25℃离心 10min,取上清液待测。注意稀释,见注意事项

二、测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。

2、标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至 1、0.8、0.5、0.2、0.1mg/mL,标准液稀释可参考表:实验中每个标准管需 150µL 标准溶液。

3、加样表:

试剂(μL

空白管

测定管

标准管

蒸馏水

150

-

-

样本

-

150

-

标准品

-

-

150

试剂三

150

150

150

涡旋混匀,沸水浴 10min盖紧,以防止水分散失,冷却至室温

蒸馏水

900

900

900

涡旋混匀,在 540nm 下测定吸光值,分别记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管。计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管、ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。标准曲线和空白管只需测 1-2 次。

三、总糖含量计算

1、标准曲线的绘制:根据标准管的浓度(x,mg/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,mg/mL)。

2、按样本质量计算:总糖(mg/g 质量)=(x×V 样总)÷W× 稀释倍数=10×x÷W× 稀释倍数

3、按血清(浆)、液体体积计算:总糖(mg/mL)=(x×V 提)÷V 样×稀释倍数=10×x× 稀释倍数

V 样总:样本体积总体积,10mL;W:样本质量,g;V 提:液体或血清样本总体积,1mL;V 样:液体或血清体积,0.1mL。

注意事项:

1、此试剂盒对于纤维素的分解程度无法达到 100%。

2、如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。


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