上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-5122 | 规格:100T/48S |
微量法 |
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。缓冲液:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×2支,4℃保存,临用前加缓冲液4mL配制,现用现配。试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体10mL×1瓶,4℃保存。
显色剂:粉剂×6瓶,4℃保存,临用前根据用量每瓶加0.4mL双蒸水溶解,再加1.6mL试剂三混匀。 样本处理
植酸酶(phytase)是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸(盐)的一类酶的总称,属磷酸单酯水解酶,它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷,降低粪便中的磷含量,减轻对环境的污染,改善营养成分的吸收和利用,因此具有极其广泛的研究和应用价值。 测定原理 植酸酶在一定温度和pH值条件下,水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物,无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物,在700nm处有特征吸收峰,根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅,超声溶解器,回旋式振荡器。
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对照管 |
测定管 |
样本(μL) |
20 |
20 |
37℃温育5min |
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试剂一(μL) |
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80 |
试剂二(μL) |
100 |
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37℃温育30min |
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试剂一(μL) |
80 |
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试剂二(μL) |
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100 |
显色剂(μL) |
100 |
100 |
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线:y = 0.1084x + 0.0236,R2 = 0.9998
1. 按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每毫克蛋白每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。植酸酶活性(μmol/min/mg prot)=(△A-0.0236)÷0.1084×V反总÷(V样×Cpr)÷T×N= 4.613×(△A-0.0236)÷Cpr×N
2. 按照样本质量计算
酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每克样本每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。植酸酶活性(μmol/min/g)=(△A-0.0236)÷0.1084×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T×N= 4.613×(△A-0.0236)÷W×N
3. 培养液等液体样品
酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每毫升液体每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。 植酸酶活性(μmol/min/mL)=(△A-0.0236)÷0.1084×V反总÷V样÷T×N = 4.613×(△A-0.0236)×N V反总:反应总体积,0.3mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白含量,mg/mL;W:样本质量,g;N:样品稀释倍数
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.0542x + 0.0236,R2 = 0.9998
1. 按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每毫克蛋白每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。植酸酶活性(μmol/min/mg prot)=(△A-0.0236)÷0.0542×V反总÷(V样×Cpr)÷T×N= 9.226×(△A-0.0236)÷Cpr×N
2. 按照样本质量计算
酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每克样本每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。植酸酶活性(μmol/min/g)=(△A-0.0236)÷0.0542×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T×N= 9.226×(△A-0.0236)÷W×N
3. 培养液等液体样品
酶活性定义:在37℃,pH5.5的条件下,每毫升液体每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性(μmol/min/mL)=(△A-0.0236)÷0.0542×V反总÷V样÷T×N = 9.226×(△A-0.0236)×N V反总:反应总体积,0.3mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白含量,mg/mL;W:样本质量,g;N:样品稀释倍数。
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