蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性检测试剂盒-蔗糖磷酸合成酶(SPS)试剂盒-上海液质



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货号:UPLC-MS-4149 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4148 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 30 mL×1

2-8℃保存

试剂一

液体 5 mL×1

-20℃保存

试剂二

粉剂 10 mg×1

2-8℃保存

试剂三

液体 5 mL×1

2-8℃保存

试剂四

液体 40 mL×1

2-8℃保存

试剂五

液体 10 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

试剂二:临用前加 1 mL 水,配制成 10 mg/mL 蔗糖溶液,再将其用蒸馏水稀释为 500 μg/mL 备用。

产品简介:

蔗糖不仅是重要的光合产物,也是植物体内运输的主要物质,还是碳水化合物的贮存形式之一。蔗糖磷酸合成酶(SPS)以果糖-6-磷酸为受体,形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶- 蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。

蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在 480nm 下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

按照组织质量(g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 480nm,蒸馏水调零。

2 样本测定(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL

测定管

对照管

标准管

空白管

样本

30

30

 

 

蒸馏水

 

150

150

180

试剂一

150

 

 

 


试剂二

 

 

30

 

混匀,25℃准确水浴 10min

试剂三

50

50

50

50

沸水浴中煮沸 10min 左右(盖紧,以防止水分散失),冷却

试剂四

700

700

700

700

试剂五

200

200

200

200

混匀,80℃水浴保温 20min,冷却后,12000rpm 常温离心 10min。吸取上清液在 480nm 下测定各管吸光值。计算ΔA 测=A 测定管-A 对照管,ΔA 标=A 标准管-A 空白管。

三、SPS 活力单位的计算

1 按照蛋白浓度计算

单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SPS 活性(U/mg prot)=(C 标准管×V1× ΔA 测÷ΔA 标)÷(V1×Cpr )÷T=50× ΔA 测÷ΔA 标÷Cpr 

2 按照样本质量计算

单位定义:每g 组织每分钟催化产生 1µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SPS 活性(U/g 质量)=(C 标准管×V 1×ΔA 测÷ΔA 标)÷(W×V1÷V2 )÷T=50× ΔA 测÷ΔA 标÷W

C 标准管:标准管浓度,500µg/mL ;V1:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V2:加入提取液体积,1mL;

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,10min。

注意事项:

尽量在 30min 内完成测定。


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