货号:UPLC-MS-4149 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4148 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 30 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂一 |
液体 5 mL×1 瓶 |
-20℃保存 |
试剂二 |
粉剂 10 mg×1 支 |
2-8℃保存 |
试剂三 |
液体 5 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂四 |
液体 40 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂五 |
液体 10 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
试剂二:临用前加 1 mL 水,配制成 10 mg/mL 蔗糖溶液,再将其用蒸馏水稀释为 500 μg/mL 备用。
蔗糖不仅是重要的光合产物,也是植物体内运输的主要物质,还是碳水化合物的贮存形式之一。蔗糖磷酸合成酶(SPS)以果糖-6-磷酸为受体,形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶- 蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在 480nm 下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 480nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
样本 |
30 |
30 |
|
|
蒸馏水 |
|
150 |
150 |
180 |
试剂一 |
150 |
|
|
|
试剂二 |
|
|
30 |
|
混匀,25℃准确水浴 10min |
||||
试剂三 |
50 |
50 |
50 |
50 |
沸水浴中煮沸 10min 左右(盖紧,以防止水分散失),冷却 |
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试剂四 |
700 |
700 |
700 |
700 |
试剂五 |
200 |
200 |
200 |
200 |
1、 按照蛋白浓度计算
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS 活性(U/mg prot)=(C 标准管×V1× ΔA 测÷ΔA 标)÷(V1×Cpr )÷T=50× ΔA 测÷ΔA 标÷Cpr
2、 按照样本质量计算
单位定义:每g 组织每分钟催化产生 1µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS 活性(U/g 质量)=(C 标准管×V 1×ΔA 测÷ΔA 标)÷(W×V1÷V2 )÷T=50× ΔA 测÷ΔA 标÷W
C 标准管:标准管浓度,500µg/mL ;V1:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V2:加入提取液体积,1mL;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,10min。
尽量在 30min 内完成测定。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到