上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4147 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4146 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 30 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 8 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
粉剂×1 瓶 |
-20℃保存 |
试剂三 |
液体 8 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 2.5 mL 试剂一充分溶解待用,用不完的试剂建议分装后,-20℃保存,避免反复冻融;
2、 标准品:20 mg 果糖,临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解,配成 20 mg/mL 果糖溶液备用,4℃保存一周。
蔗糖合成酶(Sucrose Synthase,SS)是植物糖代谢过程的关键酶,负责催化蔗糖分解与合成的可逆反应,其分解活性可以催化蔗糖水解成 UDPG 与果糖, 参与淀粉、纤维素和半纤维素的合成等代谢途径。
分解方向 SS-I 催化蔗糖和 UDP 生成果糖与 UDPG,果糖与 3,5 -二硝基水杨酸反应生成在 540nm 有特征吸收峰的棕红色物质,通过测定 540nm 处吸光值变化可计算得 SS-I 活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP 管。
组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,8000g,离心 10min,取上清置于冰上待测。
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、 将 20mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 5、4、3、2、1mg/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表 (在 1.5mL 离心管中操作) :
试剂名称(µL) |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
样本 |
20 |
20 |
- |
- |
标准溶液 |
- |
- |
20 |
- |
蒸馏水 |
- |
- |
- |
20 |
试剂一 |
80 |
|
80 |
80 |
试剂二 |
- |
80 |
- |
- |
混匀,30℃水浴 30 min 后,95℃水浴 10 min(盖紧,防止水分散失)。 |
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试剂三 |
100 |
100 |
100 |
100 |
混匀,沸水浴 5 min(盖紧,防止水分散失),冷却至室温。 |
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蒸馏水 |
800 |
800 |
800 |
800 |
混匀,置于 1mL 玻璃比色皿中,测定 540nm 处吸光值 A,分别记为 A 对照管,A 测定管,A 标准管,A 空白管。计算 ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管(标准曲线只需检测 1-2 次)。 |
1、 标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的 ΔA 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b,将 ΔA 带入方程得到 x(mg/mL)。
2、 SS-I 活性的计算:
(1) 按样本蛋白浓度计算
酶活定义:每 mg 蛋白每分钟分解蔗糖产生 1µg 果糖为 1 个酶活力单位。SS-I 酶活(U/mg prot)=x×V 提取÷(V 提取×Cpr)×103÷T = 33.33x÷Cpr
(2) 按样本质量计算
酶活定义:每 g 样本每分钟分解蔗糖产生 1µg 果糖为 1 个酶活力单位。SS-I 酶活(U/g 质量)=x×V 提取×103÷W÷T = 33.33x÷W
V 提取:提取液体积,1mL;103:单位换算系数,1mg=103µg;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL,蛋白浓度自行测定;W:样本质量,g;T:反应时间:30min。
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