上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-5030	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-5029	规格：50T/48S	紫外分光光度法

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 15 mL 蒸馏水，充分混匀。4℃可以保存 4 周；

2、 试剂四：临用前取 1 瓶加入 1.5 mL 蒸馏水，充分混匀。分装后-20℃保存，避免反复冻融，可以保存 2 周；

3、 试剂五：粉剂置于瓶内玻璃管中。临用前加入 10 mL 蒸馏水，充分混匀。-20℃分装保存，避免反复冻融， 可以保存 4 周；

4、 试剂六：临用前取 1 支加入 1 mL 蒸馏水，充分混匀；可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃可以保存 2 周；临用前按试剂六：蒸馏水=1:1 的比例稀释试剂六，现用现配；

5、 试剂七：临用前取 1 支加入 0.7 mL 蒸馏水，充分混匀；可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃可以保存 2 周；临用前按试剂七：蒸馏水=1:1 的比例稀释试剂七，现用现配。

产品说明：

蔗糖磷酸化酶（Sucrose Phosphorylase, SP）(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，属于糖基水解酶 13 家族， 是一种催化转移葡萄糖苷键的酶，能够催化蔗糖和无机磷酸盐合成 1-磷酸-葡萄糖。该酶主要以蔗糖、1-磷酸葡萄糖为供体，多类物质如多羟基的糖和糖醇、酚羟基、羧基等为受体，催化合成各种糖苷。

SP 能够催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为 6-磷酸葡萄糖，在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原 NADP+生成 NADPH，导致 340nm 光吸收值增加。通过 340nm 吸光度的增加速率来反映 SP 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、研钵/匀浆器、1mL 石英比色皿、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量(g)︰提取液体积(mL)为 1︰5-10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1 mL 提取液） 进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min ，取上清置于冰上待测。

2、细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，3000rpm 离心 5min 后弃上清；按照细胞或细菌数量（104 个）： 提取液体积（mL）为 500-1000︰1 的比例（建议 500 万个细胞或细菌加入 1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率 200 W，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min ，取上清置于冰上待测。

3、液体：直接检测。若液体浑浊可离心后取上清测定。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 340 nm，蒸馏水调零。

2、 试剂一 37℃预热 10min。

3、 操作表：

三、蔗糖磷酸化酶（SP）活性计算

            (1) 按照蛋白浓度计算

酶活定义：37℃，每毫克蛋白质每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。SP 活性（U/mg prot）=ΔA÷ε÷d×V 反总×109÷（V 样×Cpr）÷T =803.85×ΔA÷Cpr

(2) 按照样本质量计算

酶活定义：37℃，每克样本每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。SP 活性（U/g 质量）=ΔA÷ε÷d×V 反总×109÷(V 样÷V 样总×W)÷T=803.85×ΔA÷W

(3) 按照细胞数量计算

酶活定义：37℃，每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。