上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-5028 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-5027 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 50 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂一 |
液体 2.5 mL×1 瓶 |
-20℃保存 |
试剂二 |
粉剂 10 mg×1 支 |
2-8℃保存 |
试剂三 |
液体 2 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂四 |
液体 25 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂五 |
液体 6 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
试剂二:临用前加 1 mL 水,配制成 10 mg/mL 蔗糖溶液,再将其用蒸馏水稀释为 500μg/mL 备用。
蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。SS(EC 2.4.1.13)催化植物体内游离果糖和葡萄糖合成蔗糖。
SS 催化游离果糖与葡萄糖供体 UDPG 反应生成蔗糖,蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在 480nm 下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰。
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 480nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
样本 |
10 |
10 |
|
|
蒸馏水 |
|
45 |
45 |
55 |
试剂一 |
45 |
|
|
|
试剂二 |
|
|
10 |
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混匀,25℃准确水浴10min |
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试剂三 |
15 |
15 |
15 |
15 |
沸水浴中煮沸10min左右(盖紧,以防止水分散失),冷却 |
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试剂四 |
210 |
210 |
210 |
210 |
试剂五 |
60 |
60 |
60 |
60 |
混匀,80℃水浴保温 20min,冷却后,12000rpm 常温离心 10min。吸取 200μL 上清液于微量玻璃比色皿或者96 孔板中,在 480nm 下测定各管吸光值(标准管和空白管只做 1-2 管,每个测定管需要设定一个对照管)。计算ΔA 测=A 测定管-A 对照管,ΔA 标=A 标准管-A 空白管。
单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生1µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS活性(U/mg prot)=(C标准管×V1× ΔA测÷ΔA标)÷(V1×Cpr)÷T=50× ΔA测÷ΔA标÷Cpr
2. 按照样本质量计算
单位定义:每 g 组织每分钟催化产生1µg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS活性(U/g 质量)=(C标准管×V1× ΔA测÷ΔA标)÷(W×V1÷V2)÷T=50× ΔA测÷ΔA标÷W
C标准管:标准管浓度,500µg/mL ;V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T:反应时间,10min。
尽量在30min内完成测定。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到