原果胶含量检测试剂盒-原果胶检测试剂盒-上海液质



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货号:UPLC-MS-4125 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4124 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液一

液体 100 mL×1 瓶(自备)

4℃保存

提取液二

液体 30 mL×1

4℃保存

提取液三

液体 50 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 60 mL×1 瓶(自备)

4℃保存

试剂二

液体 3 mL×1

4℃保存

试剂三

液体 5 mL×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

1 提取液一:80%乙醇,自备。即将 80 mL 无水乙醇和 20 mL 蒸馏水混合。

2 试剂一:浓硫酸 60 mL,自备。

3 标准品:10 mg 半乳糖醛酸,临用前加入 0.943 mL 提取液三,配成 50 μmol/mL 的标准液。

产品说明:

果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶,不溶性果胶为原果胶。原果胶是不溶于水的物质,但可在酸、碱、盐等化学试剂及酶的作用下,加水分解转变成水溶性果胶,在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。

原果胶在碱性条件下水解为可溶性果胶,并进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在530nm处有特征吸收峰。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液一,室温快速匀浆,95℃水浴 20min,冷却至室温,4000g 25℃离心 10min 弃上清。沉淀加入 1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗 2 遍(涡旋振荡 2min 左右,4000g 25℃离心 10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入 1mL 提取液二(去除淀粉)浸泡 15 小时,4000g 25℃离心 10min,弃上清,加入 1mL 提取液三,充分匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清液待测。


二、测定步骤

1 分光光度计预热30min以上,调节波长至530nm,蒸馏水调零。

2 50μmol/mL标准液用提取液三稀释为0.7、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL的标准溶液备用。

3 操作表:

试剂名称

空白管

标准管

对照管

测定管

样本(μL

-

-

100

100

标准品(μL

-

100

-

-

蒸馏水(μL

100

-

-

-

试剂一(μL

800

800

800

800

混匀、90℃放置10min,取出后冷却

试剂二(μL

-

-

100

-

试剂三(μL

100

100

-

100

混匀,25℃静置 30min 后测定 530nm 处吸光值,分别记为 A 空白管、A 标准管、A 对照管和 A 测定管。ΔA 标准=A 标准管-A 空白管,ΔA 测定=A 测定管-A 对照管。

三、原果胶含量的计算

1 标准曲线的绘制:

以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程得到x(μmol/mL)。

2 原果胶含量的计算:原果胶含量(μmol/g 质量)=x×V提取液三÷W =x÷W V提取液三:加入提取液三的体积,1mL;W:样本质量,g。

注意事项:

1 浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热取出后冷却再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。

2 ΔA超过0.6,可将样本用提取液三进行适当稀释再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。


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