上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4125 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4124 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液一 |
液体 100 mL×1 瓶(自备) |
4℃保存 |
提取液二 |
液体 30 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
提取液三 |
液体 50 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 60 mL×1 瓶(自备) |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 3 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 5 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 提取液一:80%乙醇,自备。即将 80 mL 无水乙醇和 20 mL 蒸馏水混合。
2、 试剂一:浓硫酸 60 mL,自备。
3、 标准品:10 mg 半乳糖醛酸,临用前加入 0.943 mL 提取液三,配成 50 μmol/mL 的标准液。
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶,不溶性果胶为原果胶。原果胶是不溶于水的物质,但可在酸、碱、盐等化学试剂及酶的作用下,加水分解转变成水溶性果胶,在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。
原果胶在碱性条件下水解为可溶性果胶,并进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在530nm处有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液一,室温快速匀浆,95℃水浴 20min,冷却至室温,4000g 25℃离心 10min, 弃上清。沉淀加入 1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗 2 遍(涡旋振荡 2min 左右,4000g 25℃离心 10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入 1mL 提取液二(去除淀粉)浸泡 15 小时,4000g 25℃离心 10min,弃上清,加入 1mL 提取液三,充分匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清液待测。
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至530nm,蒸馏水调零。
2、 将50μmol/mL标准液用提取液三稀释为0.7、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL的标准溶液备用。
3、 操作表:
试剂名称 |
空白管 |
标准管 |
对照管 |
测定管 |
样本(μL) |
- |
- |
100 |
100 |
标准品(μL) |
- |
100 |
- |
- |
蒸馏水(μL) |
100 |
- |
- |
- |
试剂一(μL) |
800 |
800 |
800 |
800 |
混匀、90℃放置10min,取出后冷却 |
||||
试剂二(μL) |
- |
- |
100 |
- |
试剂三(μL) |
100 |
100 |
- |
100 |
混匀,25℃静置 30min 后测定 530nm 处吸光值,分别记为 A 空白管、A 标准管、A 对照管和 A 测定管。ΔA 标准=A 标准管-A 空白管,ΔA 测定=A 测定管-A 对照管。 |
1、 标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定带入方程得到x(μmol/mL)。
2、 原果胶含量的计算:原果胶含量(μmol/g 质量)=x×V提取液三÷W =x÷W V提取液三:加入提取液三的体积,1mL;W:样本质量,g。
1、 浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热取出后冷却再打开盖子,以防液体飞溅烧伤。
2、 若ΔA超过0.6,可将样本用提取液三进行适当稀释再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到