上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4306 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4305 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 60 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂一 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂二 |
粉剂×2 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂三 |
粉剂×1 瓶 |
-20℃保存 |
试剂四 |
液体 30 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂五 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
-20℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前加入 5 mL 蒸馏水备用,2-8℃保存两周。
2、 试剂二:临用前取 1 瓶加入 3 mL 蒸馏水备用,2-8℃保存一周(1 瓶粉剂溶解后可做 100T,为了延长使用时间,此产品多给 1 瓶粉剂)。
3、 试剂三:临用前加入 5.71 mL 50%乙醇(乙醇(V):H2O(V)=1:1)溶解备用。可以-20℃分装保存两周,避免反复冻融。
4、 试剂五:临用前加入 15 mL 试剂四溶解备用,2-8℃保存两周。
5、 标准品:10 mg 吲哚乙酸。临用前加入 1.14 mL 50%乙醇(乙醇(V):H2O(V)=1:1)溶解制成 50 μmol/mL的标准溶液,-20℃分装保存两周,避免反复冻融。
吲哚乙酸(IAA)在吲哚乙酸氧化酶的作用下,被氧化破坏失去活性。IAA氧化酶能调节植物体内吲哚乙酸的 的水平,从而影响植物的生长。
IAA在无机酸条件下与FeCl3作用生成红色产物,在530nm下有最大吸收峰。酶活力的大小可用消耗IAA的速率表示。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、超声破碎仪、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、乙醇、冰和蒸馏水。
1、组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
2、细胞或细菌样本的制备:先收集细胞或细菌样本到离心管内,弃上清,按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。12000g,4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至530nm,分光光度计蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释:将标准溶液用蒸馏水稀释为0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125 μmol/mL的标准液。
1、标准曲线的绘制:
以标准液的浓度(μmol/mL)为x轴,对应的ΔA标准为y轴绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA带入方 程中计算得到样本浓度(x,μmol/mL)。
2、吲哚乙酸氧化酶活力计算:
(1) 按蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol IAA的酶量定义为一个酶活性单位。IAA氧化酶酶活(U/mg prot)=x×V酶促×1000÷(V样×Cpr)÷T=333×x÷Cpr
(2) 按样本质量计算:
单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol IAA的酶量定义为一个酶活性单位。IAA氧化酶酶活(U/g 质量)=x×V酶促×1000÷(W÷V提取×V样)÷T=333×x÷W
(3) 按细胞或细菌数量计算:
单位的定义:每104个细胞或细菌在反应体系中每分钟消耗1nmol IAA的酶量定义为一个酶活性单位。IAA氧化酶酶活(U/104 cell)=x×V酶促×1000÷(500÷V提取×V样)÷T=0.667×x
V酶促:酶促反应总体积,0.08mL;1000:单位换算系数,1μmol=1000nmol;V样:加入的样本体积,0.008mL; Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V提取:提取液体积,1mL;500:500万个细胞;T:反应时间, 30min。
1、当ΔA大于0.4或者A对照管大于1时,建议将样本用提取液稀释后进行测定;ΔA过小时,可增加酶促反应时间(1h或2h)或增加加入的样本体积来测定。注意同步修改计算公式。
2、试剂一溶解变黑后则不能使用;试剂二有毒性,做好防护措施。
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