货号:UPLC-MS-4395 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4394 | 规格:50T/48S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 50 mL×1 瓶(自备) |
常温保存 |
工作液 |
液体 50 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 提取液:自备异丙醇;
2、 标准品:10 mg 胆固醇,临用前加入 517 μL 异丙醇,振荡溶解,即为 50 μmol/mL 的胆固醇标准溶液,再将其用异丙醇稀释为 1 μmol/mL 的标准液,待测。
FC是构成细胞膜的主要成分,也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。测定原理:FC氧化酶催化FC生成4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O2、4- 氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物,在500nm有吸收峰,其颜色深浅与FC含量成正比。
最低检出限:0.055 μmol/mL
线性范围:0.0625-4 μmol/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、异丙醇、蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声2秒,间隔3秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min, 取上清置于冰上待测。
3. 血清(浆)样本:直接测定。
试剂名称(µL) |
空白管 |
标准管 |
测定管 |
异丙醇 |
50 |
|
|
标准液 |
|
50 |
|
待测上清 |
|
|
50 |
工作液 |
950 |
950 |
950 |
FC 含量(μmol/dL)=C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×100=100×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) C 标准液:标准液的浓度,1μmol/mL;100:单位换算系数,1dL=100mL。
2. 组织中 FC 含量计算:
(1) 按样本蛋白浓度计算
FC 含量(μmol/mg prot)=C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样总÷(Cpr×V 样总)=(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
(2) 按样本质量计算
FC 含量(μmol/g 质量)=C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样总÷W=(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准液:标准液的浓度,1μmol/mL;V 样总:加入提取液的体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W: 样本质量,g。
3. 细胞、细菌中 FC 含量计算
FC 含量(μmol/104 cell)=C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样总÷500=0.002×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准液:标准液的浓度,1μmol/mL;500:细菌或细胞数量,500 万;V 样总:加入提取液的体积,1mL。
如果样本吸光值大于 1.5,建议将样本用提取液稀释后进行测定。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到