溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取 1 瓶试剂二 A 加入 5mL 试剂二 B 充分溶解，用不完的试剂建议-20℃分装保存 4 周， 避免反复冻融；

2. 试剂三：临用前取 1 瓶加 3 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂建议-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融；

3. 试剂四：临用前取 1 支加入 500 μL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融。

4. 试剂五：临用前加入 500 μL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存 8 周，避免反复冻融。

AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。AGP催化的逆向反应生成G-1-P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性.

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1. 紫外分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，紫外分光光度计蒸馏水调零

2. 在 EP 管中按顺序加入下列试剂

迅速混匀后在 340nm 波长下测定 10s 吸光值A1 和 130s 吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。

三、AGP 活性计算

a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1、按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。AGP活性（U/mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷T÷ （Cpr×V 样本）=380.5×ΔA÷Cpr

（此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度）

2、按照样本质量计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。AGP活性（U/g 质量）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷T÷ （W×V 样本÷V 提取）=380.5×ΔA÷W

T：反应时间，15min；ε：NADPH消光系数，6.22×10 -3mL/nmol/cm；V反总：反应总体积，0.284mL；d：石英比色皿光程，1cm；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样本：加入的样本体积，0.008mL；V提取：加入的提取液体积，1mL；W：样本质量，g。

b. 使用96孔UV板测定的计算公式如下：

1、按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。AGP活性（U/mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷T÷ （Cpr×V 样本）=634.1×ΔA÷Cpr

（此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度）

2、按照样本质量计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。AGP活性（U/g 质量）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷T÷ （W×V 样本÷V 提取）=634.1×ΔA÷W

T：反应时间，15min；ε：NADPH消光系数，6.22×10 -3mL/nmol/cm；V反总：反应总体积，0.284mL；d：96

孔板光程，0.6cm；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样本：加入的样本体积，0.008mL；V提取：加入的提取液体积，1mL；W：样本质量，g。