上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4583	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-4582	规格：25T/24S	可见分光光度法
货号：UPLC-MS-4582	规格：50T/48S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

25T 溶液的配制：

1、 试剂二：溶于 1 mL 丙酮，可分装后-20℃保存。临用前再用丙酮 100 倍稀释后使用。

2、 试剂三：临用前加入 2 mL 丙酮溶解备用。

3、 工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三按 1：1 混合，现用现配。

50T 溶液的配制：

1、试剂二：溶于 1 mL 丙酮，可分装后-20℃保存。临用前再用丙酮 100 倍稀释后使用。

2、试剂三：临用前加入 3 mL 丙酮溶解备用。

3、工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三按 1：1 混合，现用现配。

产品说明：

线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同时辅基FAD还原为FADH₂，后者进一步还原氧化型辅酶Q生成还原型辅酶Q，是呼吸电子传递链的支路。

复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q可进一步还原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm 有特征吸收峰，通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、丙酮、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1.0mL 提取液，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。

2、 4 ℃ 600g 离心 10min。将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000g 离心 15min。

3、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅱ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。

4、 在沉淀中加入 400μL 提取液，超声波破碎（功率 20%，超声 5 秒，间隔 10 秒，重复 15 次），用于复合体Ⅱ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计预热30min 以上，调节波长至605nm，蒸馏水调零。

2、 将试剂一37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）预热15min。

3、 在1mL玻璃比色皿中分别加入：

三、复合体Ⅱ活力单位的计算

按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。复合体Ⅱ活力(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=476.2×ΔA÷Cpr

V反总：反应体系总体积，10-3L；ε：2，6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05mL；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

注意事项：

1、 为保证实验结果的准确性，需先取 1-2 个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于 1.5），可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若 ΔA 大于 0.4，需将样本稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数）；若 ΔA 偏小，则可以通过增加加入的样本体积来提高灵敏度。

2、 样本蛋白浓度需自行测定。由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约 1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

3、 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活，若用样本质量计算，则需加测胞浆提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方为总酶活。

4、 本试剂盒试剂足够完成 50 管反应。

5、 附:使用样本重量计算公式：（样本检测数为 50T/24S）

A、上清中复合体II活力的计算:

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。复合体II活性（U/g 质量）=[ΔA1×V反总÷（ε×d）×109]÷(W÷V提取×V样本)）÷T=476.2×ΔA1÷W

ΔA1：上清测定值；V反总：反应体系总体积，10-3L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104L/mol/cm；d： 比色皿光径，1cm；V提取：加入提取液体积，1mL；V样：加入样本体积，0.05mL；T：反应时间，2min；W： 样本重量，g；109：单位换算系数，1mol=109nmol。

B、沉淀中复合体II活力的计算: