上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-5089	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-5088	规格：50T/24S	可见分光光度法
货号：UPLC-MS-5088	规格：50T/48S	可见分光光度法
货号：UPLC-MS-5088	规格：10T/9S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 提取液：内含不溶物，使用前摇匀。

2、 试剂二：临用前加蒸馏水 1 mL 充分溶解，4℃保存。

3、 试剂四：临用前加入试剂一 1 mL 充分溶解，4℃避光保存。

产品说明：

AAT是一个多功能蛋白大家族，主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应，在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇，同时还原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰， 测定412 nm吸光度增加速率，来计算AAT活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织样本：称取约 0.1g 样本加提取液 1mL，冰上充分研磨，15000g 4℃离心 20min，上清液待测。血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min  以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

2、 试剂一在37℃水浴保温20 min以上。

3、 样本测定：

将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿/96 孔板中，加试剂四的同时开始计时，在 412nm 波长下记录 10s 时的初始吸光度 A1 和 130s 后的吸光值 A2，计算 ΔA 空=A2 空-A1 空；ΔA 测=A2 测-A1 测，ΔA=ΔA 测-ΔA 空。

三、AAT活性计算

A、使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1、按样本蛋白浓度计算

单位的定义：37℃中每mL反应体系下每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。

AAT (U/mg prot) =ΔA÷0.001÷(Cpr×V样) ÷T×（V反总÷1）=5000×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按样本质量计算

单位的定义：37℃中每mL反应体系下每克组织每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。

AAT (U/g  质量) =ΔA÷0.001÷(V样÷V样总×W) ÷T×（V反总÷1）=5000×ΔA÷W

3、按血清浓度计算

单位的定义：37℃中每mL反应体系下每mL血清每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。

AAT (U/mL  血清) =ΔA÷0.001÷V样÷T×（V反总÷1）=5000×ΔA

Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL；V样：加入反应体系中上清液体积，0.02mL；W ：样本质量，g；V样总： 提取液体积，1 mL；T：反应时间，2min；V反总：反应总体积，0.2mL；1：每mL反应体系。

B、使用96孔板测定的计算公式如下：

1、按蛋白浓度计算

AAT活力单位定义：37℃中每mL反应体系下每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.0005个单位为1U。AAT (U/mg prot) =ΔA÷0.0005÷(Cpr×V样) ÷T×（V反总÷1）= 10000×ΔA÷Cpr

2、按样本质量计算

AAT活力单位定义：37℃中每mL反应体系下每克组织每分钟催化吸光值变化0.0005个单位为1U。AAT (U/g  质量) =ΔA÷0.0005÷(V样÷V样总×W) ÷T×（V反总÷1）=10000×ΔA÷W

3、按血清浓度计算

单位的定义：37℃中每mL反应体系下每mL血清每分钟催化吸光值变化0.0005个单位为1U。

AAT (U/mL  血清) =ΔA÷0.0005÷V样÷T×（V反总÷1）=10000×ΔA1

Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，蛋白质浓度需要另外测定；V样：加入反应体系中上清液体积，0.02mL； W：样本质量，g；V样总：提取液体积，1mL；T：反应时间，2min；V反总：反应总体积，0.2mL；1：每mL反应体系。