上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
| 货号：UPLC-MS-4117 | 规格：100T/96S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-4116 | 规格：50T/48S | 可见分光光度法 |
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液一 |
液体 400 mL×1 瓶（自备） |
2-8℃保存 |
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提取液二 |
液体 100 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂一 |
粉剂×2 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
液体 10 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
粉剂×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 提取液一：80%乙醇 400 mL，即将 320 mL 无水乙醇和 80 mL 蒸馏水混合，自备。提供一个 125 mL 空瓶。
2、 标准品：10 mg 葡萄糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解，配成 10 mg/mL 葡萄糖溶液备用，2-8℃保存两周。
3、 工作液的配制：取一瓶试剂一中加入 2.5 mL 试剂二，充分混匀，如较难溶解，可充分震荡或加热搅拌； 用不完的试剂可以 2-8℃保存一周。
产品说明：
纤维素是由β-D-葡萄糖单元以 β-1,4-糖苷键连接而成的直链多聚体，通常与半纤维素、果胶及木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。以纤维素为原料的产品广泛应用于食品、造纸、塑料、炸药、电工及科研器材等领域。
纤维素在酸性条件下加热能分解成β-D-葡萄糖。在强酸作用条件下利用与蒽酮显色剂测定纤维素含量。
技术指标：
最低检出限：0.0037 mg/mL
线性范围：0.00391-0.3 mg/mL
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰盒、丙酮、浓硫酸、无水乙醇、蒸馏水和EP管。
操作步骤
1、 细胞壁物质（CWM）的提取：
（1） 称取约 0.3g（记为 W1）样本，加入 1mL 提取液一，室温快速匀浆，90℃水浴 20min，冷却至室温，6000g， 25℃离心 10min，弃上清。
（2） 沉淀先后用 1.5mL 提取液一和丙酮各洗两遍（涡旋振荡 2min 左右，6000g，25℃离心 10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁。
（3） 在粗细胞壁中加入 1mL 提取液二（去除淀粉）浸泡 15 小时，6000g，25℃离心 10min，弃上清，将沉淀用蒸馏水清洗两遍（涡旋振荡 2min 左右，6000g，25℃离心 10min，弃上清即可），之后干燥沉淀（60-100℃ 均可），得到细胞壁物质（CWM），称重记为 W2。
2、 纤维素的提取：
（1） 称取烘干的CWM 约 5mg（记为 W3），加入 0.5mL 蒸馏水充分匀浆，匀浆液转移至 EP 管中，用蒸馏水定容至 0.5mL。
（2） 将定容后的匀浆液置于冰水混合物中，缓慢加入 0.75mL 浓硫酸，缓慢混匀，冰水浴中静置 30min。8000g， 4℃离心 10min，取上清液，用蒸馏水稀释 20 倍后待测。
注意：1. 若样本或者干燥后的沉淀质地坚硬，可以先研碎再进行后续步骤
2. 在提取纤维素的过程中，首先，置于冰水浴中的 EP 管需要固定，不要上下左右浮动，一方面保障自身安全，另一方面防止冰水混合物进入 EP 管造成试验误差；再者，加入浓硫酸时，建议枪头伸入样本液面以下， 缓慢加入，防止液面沸腾及样本碳化。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 将10mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078、0.0039mg/mL的标准溶液备用。
3、 标准品稀释表
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序号 |
稀释前浓度（mg/mL） |
标准液体积（µL） |
蒸馏水体积（µL） |
稀释后浓度（mg/mL） |
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1 |
10 |
100 |
900 |
1 |
|
2 |
1 |
50 |
350 |
0.125 |
|
3 |
0.125 |
200 |
200 |
0.0625 |
|
4 |
0.0625 |
200 |
200 |
0.03125 |
|
5 |
0.03125 |
200 |
200 |
0.015625 |
|
6 |
0.015625 |
200 |
200 |
0.0078 |
|
7 |
0.0078 |
200 |
200 |
0.0039 |
4、 操作表 (在1.5 mL离心管中) ：
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试剂名称（µL ） |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
|
样本 |
150 |
- |
- |
|
标准溶液 |
- |
150 |
- |
|
蒸馏水 |
- |
- |
150 |
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工作液 |
35 |
35 |
35 |
|
浓硫酸 |
315 |
315 |
315 |
1、标准曲线的绘制：根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA（y，ΔA）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）
2、纤维素含量的计算：
（1） 按样本质量计算
纤维素（mg/g 质量）=x×V 提取×20× （W2÷W3 ）÷W1÷1.11=22.52×x×W2÷W3÷W1
（2） 按样本细胞壁物质（CWM）质量计算
纤维素（mg/g 干重）=x×V 提取×20÷W3÷1.11=22.52x÷W3
1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为纤维素含量的常数，即111 µg 葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于100 µg纤维素蒽酮试剂所显示的颜色；V提取：纤维素提取液体积，1.25 mL（0.5 mL蒸馏水+0.75 mL浓硫酸）；20：样本稀释倍数；W1：样本质量，0.3 g；W2：样本细胞壁物质（CWM）质量，g；W3，提取纤维素时称取的细胞壁物质（CWM） 质量，g。
注意事项
1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2、 浓硫酸具有强腐蚀性，操作时各个步骤均需特别注意：纤维素提取在加入浓硫酸时，建议枪头伸入样本液面以下，缓慢加入，以防止液体飞溅烧伤；95℃水浴结束取出后需冷却至室温再打开EP管盖，以防液体飞溅烧伤。
3、 由于试剂二挥发性强且具有刺激性气味，建议在通风橱中进行工作液的配制
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到
