上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4607	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-4606	规格：50T/48S	可见分光光度法

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前取一瓶加入 100mL 蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂 4℃可保存 4 周；

2、 工作液配制：临用前取一瓶试剂三，戴一次性手套，小心打开试剂三瓶盖，缓慢加入 12mL 试剂二，充分溶解，4℃避光可保存 1 周。

产品说明：

细胞色素 P450 酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素 P450 和细胞色素 b5 是 P450 酶系的两个血红素蛋白，其比值的变化与 P450 代谢活性密切相关。

氧化型细胞色素 b5 经连二亚硫酸钠还原后，在 424nm 处有最大吸收峰，通过测定 424nm 和 490nm 处吸光值的差异，即可计算出细胞色素 b5 的含量。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、超速离心机、恒温培养箱、研钵/匀浆器、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本提取（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、除去细胞核和线粒体等：称约 0.5g 组织，加入 4℃预冷的 1mL 试剂一，冰上充分研磨，10 000g，4℃离心 30min，取上清液，转移到超速离心管中。

2、粗制微粒体：4℃，100 000g，离心 60min，弃上清液。

3、除血红蛋白等杂质：向步骤 2 的沉淀中加 1mL 试剂一，盖紧后充分震荡溶解，100 000g 离心 30min，弃上清液。

4、最终微粒体：向步骤 3 的沉淀中加 0.5mL 试剂二，盖紧后充分震荡溶解，即待测液，置于冰上待测。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 424nm 和 490nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、 空白管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，依次加入 10μL 蒸馏水、200μL 工作液，室温静置 2min，分别测定 424nm 和 490nm 处吸光值，424nm 处吸光值记为 A 空白管 1，490nm 处吸光值记为 A 空白管 2。计算 ΔA 空白管=A 空白管 1-A 空白管 2。注：空白管只需做 1-2 次。