上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
| 货号：UPLC-MS-4483 | 规格：100T/48S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-4482 | 规格：50T/24S |
紫外分光光度法 |
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液 |
液体 50 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂一 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂二 |
液体 15 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂三 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前加入 10 mL 试剂二，充分溶解；
2、 试剂三：临用前加入 10 mL 蒸馏水，充分溶解。
胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物酪氨酸在 275nm 下有特征吸收峰。通过测定吸光值的变化来计算酶活。
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆或者 0.1mL 胃液加入 0.9mL 提取液。10000rpm 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待测。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至275nm，蒸馏水调零。
2、 操作表：
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试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
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样本 |
20 |
- |
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试剂一 |
100 |
100 |
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混匀，37℃保温 10min。 |
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试剂三 |
100 |
100 |
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摇匀 1min。 |
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样本 |
- |
20 |
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混匀后10000rpm 4℃ 离心10min，取上清用微量石英比色皿/96 孔UV 板测定A275nm。计算∆A=A 测定-A 对照。 |
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A、用微量石英比色皿
1、按样本蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/mg prot）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（Cpr×V 样本）÷T=0.786×∆A÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/g 质量）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（W×V 样本÷V 提）÷T=0.786×∆A÷W
3、按液体体积计算
活性单位定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/mL）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（V 样本÷V 提×V 液）÷T= 7.86×∆A
Cpr：样本蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：样本质量，g；V 反总：反应总体积，0.22mL；V 提：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V 样本：加入样本体积，0.02mL；V 液：液体体积，0.1mL；ε： 酪氨酸吸光系数，1.4μmol-1·mL·cm-1；d：光程，1cm。
1、按样本蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/mg prot）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（Cpr×V 样本）÷T = 1.31×∆A÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/g 质量）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（W×V 样本÷V 提）÷T =1.31×∆A÷W
3、按液体体积计算
活性单位定义：37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。胃蛋白酶酶活（U/mL）=（∆A÷ε÷d×V 反总）÷（V 样本÷V 提×V 液）÷T =13.1×∆A
Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：样本质量，g；V 反总：反应总体积，0.22mL；V 提：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min；V 样本：加入样本体积，0.02mL；V 液：液体体积，0.1mL；ε： 酪氨酸吸光系数，1.4μmol-1·mL·cm-1；d：光程，0.6cm。
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