上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4377 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4378 | 规格:50T/24S | 可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 35 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 50 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 6 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 10 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂四 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 提取液:内含不溶物,使用前摇匀;
2、 试剂四:临用前加入 10 mL 蒸馏水混匀,4℃保存一周,如果一次性用不完,可分装于-20℃保存待用;
3、 标准品:10mg 维生素 B6,临用前加入 1 mL 试剂一,配成 10 mg/mL 的标准液。
维生素 B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形式存在,是一种水溶性维生素,肉类、全谷类、蔬菜和坚果类中含量较高。在机体中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢,对生物体具有极其重要的作用。VB6 与 4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物,在 400nm 有特征吸收峰。
最低检出限:0.0179 mg/mL
线性范围:0.03125-1 mg/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管、冰和蒸馏水。
组织:将样本磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 0.6mL 提取液)加入提取液,60℃浸提 30min,加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定(动物组织及其他蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟或反复离心 2-3 次至上清无混浊)。
细胞或细菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定。液体:直接检测。
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 400nm,蒸馏水调零。
2. 将 10mg/mL 标准液用试剂一稀释为 1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL 的标准溶液备用。
3. 操作表:在 1.5mL 离心管或 96 孔板中依次加入下列试剂
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对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
样本(µL) |
40 |
40 |
- |
- |
试剂一(µL) |
- |
- |
- |
40 |
标准溶液(µL) |
- |
- |
40 |
- |
试剂二(µL) |
40 |
40 |
40 |
40 |
试剂三(µL) |
60 |
60 |
60 |
60 |
试剂四(µL) |
- |
60 |
60 |
60 |
蒸馏水(µL) |
60 |
- |
- |
- |
充分混匀,25℃反应 20min,测定 400nm 处吸光值,记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA=A 标准管-A 空白管。(空白管只要做 1-2 管) |
1、 标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的 ΔA 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b,将 ΔA 带入方程得到 x(mg/mL)。
2、 维生素 B6 含量的计算:
(1) 按蛋白浓度计算:VB6(mg/mg prot)=x×V 提取÷(V 提取×Cpr)= x÷Cpr
(2) 按样本质量计算:VB6(mg/g 质量)=x×V 提取÷W=x÷W
(3) 按照细胞数量计算:VB6(mg/104 cell)=x×V 提取÷细胞数量(万个)=x÷细胞数量(万个)
(4) 按液体体积计算:VB6(mg/mL)=x×V 样÷V 样=xV 提取:样本提取体积,1mL;V 样:加入的样本体积,0.04mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2、 蛋白浓度较高的样本,比如动物组织、豆类种子等,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再测定,在计算公式中乘以稀释倍数。
3、 显色完成后立即进行测定,尽量保证反应时间一致。
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