维生素 B6(VB6)含量检测试剂盒-维生素 B6(VB6)检测试剂盒-上海液质



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货号:UPLC-MS-4377 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4376 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 35 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 50 mL×1

4℃保存

试剂二

液体 6 mL×1

4℃保存

试剂三

液体 10 mL×1

4℃保存

试剂四

粉剂×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

1 提取液:内含不溶物,使用前摇匀;

2 试剂四:临用前加入 10 mL 蒸馏水混匀,4℃保存一周,如果一次性用不完,可分装于-20℃保存待用;

3 标准品:10mg 维生素 B6,临用前加入 1 mL 试剂一,配成 10 mg/mL 的标准液。

产品说明:

维生素 B6(Vitamin B6)又称吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在体内以磷酸酯的形式存在,是种水溶性维生素,肉类、全谷类、蔬菜和坚果类中含量较高。在机体中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢,对生物体具有极其重要的作用。VB6 与 4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物,在 400nm 有特征吸收峰。

技术指标:

最低检出限:0.0179 mg/mL

线性范围:0.03125-1 mg/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

组织:将样本磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 0.6mL 提取液)加入提取液,60℃浸提 30min,加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定(动物组织及其他蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟或反复离心 2-3 次至上清无混浊)。

细胞或细菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,16000rpm 离心 10min,取上清测定。液体:直接检测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 400nm,蒸馏水调零。

2. 10mg/mL 标准液用试剂一稀释为 1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL 的标准溶液备用。

3. 操作表:在 1.5mL 离心管或 96 孔板中依次加入下列试剂

 

对照管

测定管

标准管

空白管

样本(µL

40

40

-

-

试剂一(µL

-

-

-

40

标准溶液(µL

-

-

40

-

试剂二(µL

40

40

40

40

试剂三(µL

60

60

60

60

试剂四(µL

-

60

60

60

蒸馏水(µL

60

-

-

-

充分混匀,25℃反应 20min,测定 400nm 处吸光值,记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA=A 标准管-A 空白管。空白管只要做 1-2 管)

三、维生素 B6 含量计算

1 标准曲线的绘制:以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的 ΔA 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b,将 ΔA 带入方程得到 x(mg/mL)。

2 维生素 B6 含量的计算:

(1) 按蛋白浓度计算:VB6(mg/mg prot)=x×V 提取÷(V 提取×Cpr)= x÷Cpr

(2) 按样本质量计算:VB6(mg/g 质量)=x×V 提取÷W=x÷W

(3) 按照细胞数量计算:VB6(mg/104 cell)=x×V 提取÷细胞数量(万个)=x÷细胞数量(万个)

(4) 按液体体积计算:VB6(mg/mL)=x×V 样÷V 样=xV 提取:样本提取体积,1mL;V 样:加入的样本体积,0.04mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

注意事项:

1 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2 蛋白浓度较高的样本,比如动物组织、豆类种子等,若显色完成后有沉淀产生,将样本稀释后再测定,在计算公式中乘以稀释倍数。

3 显色完成后立即进行测定,尽量保证反应时间一致。


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