上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4375 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4374 | 规格:50T/48S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 35 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
稀释液 |
液体 60 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 6 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 7 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 6 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂四 |
液体 15 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂五 |
液体 8 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、提取液:内含不溶物,使用前摇匀;
2、标准品:10mg 维生素 B1。临用前加入 1mL 稀释液,配成 10mg/mL(即 10000µg/mL)的标准液。
维生素B1(Vitamin B1)又称硫胺素,以辅酶形式参与糖的分解代谢,在生物体能量代谢中有重要的作用。VB1在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾,亚铁氰化钾与Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝,测定布鲁士蓝在704nm下的特征吸收峰,即可反映VB1的含量。
最低检出限: 7.366 µg/mL
线性范围: 7.8125-250 µg/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织:将样本磨碎,按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 0.6mL 提取液)加入提取液,60℃浸提 30min,加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,13000g 离心 10min,取上清测定(动物组织、豆类种子等蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟或反复离心 2-3 次至上清无浑浊)。
2、细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 0.6mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);加蒸馏水 0.4mL,混匀后于 25℃,13000g 离心 10min,取上清测定。
3、液体:直接检测。
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至704nm,蒸馏水调零。
2、 将10mg/mL(10000µg/mL)标准液用稀释液稀释为250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125μg/mL的标准溶液备用。
3、 操作表(在1.5mLEP管中进行下列操作):
|
测定管 |
标准管 |
空白管 |
样本(µL) |
100 |
- |
- |
稀释液(µL) |
- |
- |
100 |
标准品溶液(µL) |
- |
100 |
- |
试剂一(µL) |
80 |
80 |
80 |
试剂二(µL) |
100 |
100 |
100 |
充分混匀,80℃水浴反应30min。 |
|||
试剂三(µL) |
80 |
80 |
80 |
试剂四(µL) |
220 |
220 |
220 |
试剂五(µL) |
120 |
120 |
120 |
蒸馏水(µL) |
300 |
300 |
300 |
充分混匀,反应 5min,测定 704nm 处吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A 空白管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。空白管只需做 1-2 次。 |
1、标准曲线的绘制:以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA带入方程得x(μg/mL)。
2、维生素B1含量的计算:
(1) 按样本蛋白浓度计算:VB1(μg/mg prot)=x×V样总÷(Cpr×V样总)= x÷Cpr
(2) 按样本质量计算:VB1(μg/g 质量)=x×V样总÷W = x÷W
(3) 按细胞数量计算:VB1(μg/104 cell)=x×V样总÷细胞数量(万个)=x÷细胞数量(万个)
(4) 按液体体积计算:VB1(μg/mL)=xV样总:样本总体积,1mL; Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
1、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2、 蛋白浓度较高的样本,比如动物组织,豆类种子等建议将样本稀释20倍或40倍后再测定并在计算公式中乘以稀释倍数。
3、 显色完成后立即进行测定,若显色完成后有沉淀产生,将其摇匀后测定。
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