上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4215 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4214 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 30 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂一 |
粉剂×2 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂二 |
液体 60 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前取 1 瓶加入 7 mL 蒸馏水溶解备用,现用现配;用不完的试剂 2-8℃保存 4 周;
2、 标准品:5 μmol/mL 对硝基苯酚溶液。
β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(C1,EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内,是微生物纤维素降解酶系的主要组分,也是水解天然纤维素的必需组分,C1 酶作用于纤维素线状分子的末端,水解 β-葡萄糖苷键,每次切下 1 个纤维二糖分子。C1 能够催化对硝基苯纤维二糖苷 (PNPC)生成对硝基苯酚,后者在 400 nm 有特征光吸收。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、天平、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、1 mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织:按照组织质量(g)︰提取液体积(mL)为 1︰5~10 的比例(建议称取 0.1 g 组织,加入 1 mL 提取液)进行冰浴匀浆。然后 10000g,4℃离心 10 min,取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌:按照细胞数量 104 个︰提取液体积(mL)500~1000 : 1 的比例(建议 500 万细胞加入 1 mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 200W,超声 3s,间隔 7s,总时间 3 min),然后 10000g,4℃,离心 10 min,取上清置冰上待测。
3、血清(浆)等液体:直接测定。
1、 分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 400 nm,蒸馏水调零。
2、 标准溶液的稀释: 取 50μL 5 μmol/mL 对硝基苯酚溶液, 加入 950μL 蒸馏水, 充分混匀, 配制成 0.25μmol/mL 标准液使用,现用现配。(实验中每管需要 100μL,为减小实验误差,故配制大体积。)
3、 操作表(在 1.5 mL 离心管中依次加入下列试剂):
试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
试剂一(µL) |
400 |
- |
- |
- |
蒸馏水(µL) |
- |
400 |
400 |
500 |
标准液(µL) |
- |
- |
100 |
- |
样本(µL) |
100 |
100 |
- |
- |
置于 37℃水浴锅或恒温培养箱准确反应 1 h |
- |
- |
||
试剂二(µL) |
1000 |
1000 |
1000 |
1000 |
涡旋混匀后室温放置 2 min,测定 400 nm 的吸光度,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管。标准管和空白管只需测 1-2 次。
1、按照样本蛋白浓度计算
酶活定义:每 mg 蛋白在反应体系中每小时生成 1 nmol 对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
C1(U/mg prot)=ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标)×1000×V 样÷(Cpr×V 样)÷T=250×ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr
2、按照样本质量计算
酶活定义:每 g 样本在反应体系中每小时生成 1 nmol 对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
C1(U/g 质量)= ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标)×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×W)÷T=250×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W
3、按照细菌或真菌数量计算
酶活定义:每 104 个细菌或真菌在反应体系中每小时生成 1 nmol 对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。C1(U/104 cell)= ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标)×1000×V 样÷(细菌或真菌数量×V 样÷V 样总)÷T=250×ΔA 测定÷ΔA 标准÷细菌或真菌数量
4、按液体体积计算
酶活定义:每毫升液体在反应体系中每小时催化生成 1 nmol 对硝基苯酚为一个酶活力单位。C1(U/mL)= ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标)×1000×V 样÷V 样÷T=250×ΔA 测定÷ΔA 标准
C 标:标准溶液浓度:0.25 μmol/mL;V 样:加入的样本体积,0.1 mL;V 样总:加入的提取液体积,1 mL;Cpr: 上清液蛋白浓度,mg/mL;T:反应时间,1 h;细菌或真菌数量:以万计;W:样本质量,g;1000:换算系数,1 μmol=1000 nmol。
1、若吸光度大于 1 时,建议将样本用提取液稀释后进行测定。计算公式乘以稀释倍数。
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