上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-6026	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-6025	规格：50T/48S	紫外分光光度法

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二 A 液：临用前取一支加入 1.2mL 蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃可保存 3 周。避免反复冻融；

2、 试剂二 B 液：临用前取一支加入 600μL 蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃可保存 3 周。避免反复冻融；

3、 试剂三：临用前取一支加入 400μL 蒸馏水，充分溶解。用不完的试剂分装后-20℃保存，可以保存 3 周。避免反复冻融；

4、 标准品 1：8mg 3-羟基丁酸钠。临用前加入 0.98mL 蒸馏水，充分溶解，即 8mg/mL 3-羟基丁酸钠标准溶液，4℃可以保存 4 周。临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成 0.2mg/mL 标准溶液待用，即为标准溶液 1；

5、 标准品 2：8mg 乙酰乙酸锂。临用前加入 0.95mL 蒸馏水，充分溶解，即 8mg/mL 乙酰乙酸锂标准溶液，-20℃可以保存 4 周。临用前根据试验所需量用蒸馏水稀释成 0.05mg/mL 标准溶液待用，即标准溶液 2；

6、 BOH 工作液配制：临用前根据试验所需量将试剂一A 液、试剂二A 液 、试剂三按照850μL:40μL:10μL（共900μL，1T 的量）的比例配成工作液，充分混匀，置于 37℃保温 15min（此步骤不可省略），现用现配，工作液在 4h 内用完；

7、 AcAc 工作液配制：临用前根据试验所需量将试剂一 B 液、试剂二 B 液、试剂三按照 870μL:20μL:10μL（共900μL，1T 的量）的比例配成工作液，充分混匀，置于 37℃保温 15min（此步骤不可省略），现用现配，工作液在 4h 内用完。

产品说明：

酮体是肝脏脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸（AcAc）、β-羟丁酸（BOH）及丙酮三者统称。酮体中丙酮的生成量相当小，生成后即被吸收。乙酰乙酸和 β-羟丁酸则经血流进入肝外组织，在此被氧化，经柠檬酸循环提供更多能量给那些组织使用，例如骨、心肌和肾皮质。在 pH 7.0 和 37℃条件下，BOH 在 β-羟丁酸脱氢酶（HBDH）催化下脱氢生成乙酞乙酸，同时 NAD+被还原成NADH；在 pH 8.8 和 37℃条件下，AcAc 被 HBDH 还原为 3-羟基丁酸酯或脱羧生成丙酮，同时 NADH 被氧化成NAD+，NADH 在 340nm 波长下有特征吸收峰，通过检测在 340nm 波长下的吸光值变化可以计算出 BOH 和 AcAc 的含量，从而计算出样本中酮体的含量。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、低温离心机、可调式移液器、水浴锅/恒温培养箱、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

血清（浆）、尿液等液体样本：直接测定。（若有浑浊可以离心取上清后测定）

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，用蒸馏水调零。

2、 BOH 含量测定。

3、 AcAc 含量测定。