上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4178	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-4177	规格：50T/48S	紫外分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂四：用前取 1 支加入 1.5 mL 试剂一充分溶解，-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融；

2、 试剂五：用前取 1 支加入 1.5 mL 试剂一充分溶解，-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融；

3、 工作液的配制：临用前将试剂三离心，取 10 μL 试剂三，加 7 mL 试剂一、1.5 mL 试剂四、1.5.mL 试剂五， 充分混合（约 66T），现用现配，也可根据样本量按比例配制；

4、 试剂八的配制：

（1） 临用前取 1 瓶试剂八加入 2.5 mL 试剂二溶解，再加入 1 支试剂七溶解，可-20℃分装保存 4 周， 避免反复冻融；

（2） 用前试剂六先离心，取 14 μL 试剂六加入 1.46mL 上述（1）中溶液，充分混合（约 36T），现用现配，也可根据样本量按比例配制。

产品说明：

糖原合成酶（Glycogen synthase , GCS）将UDPG的糖基加到原有糖原或是糖原蛋白的非还原端，以α-1,4糖苷键连接。GCS是动物机体糖原合成过程的限速酶，同时也是胰岛素作用的主要靶酶，在糖代谢及维持血糖相对稳定的过程中有着重要作用。

GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UDP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH生成NAD+， 在340 nm下测定NADH的下降速率，即可反映GCS活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、超声破碎仪、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（104 个）:提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 200w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

血清等液体：直接检测。（若溶液浑浊则离心后取上清进行测定）

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，紫外分光光度计蒸馏水调零。

2、 临用前将工作液与试剂八置于37℃水浴锅中预热5min（工作液用多少预热多少）。

3、 操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂：

三、GCS 酶活计算

A、按微量石英比色皿计算：

1. 按蛋白浓度计算

酶活定义：每毫克蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

GCS酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷（V样×Cpr）÷T=3215.4×ΔA÷Cpr

2. 按样本质量计算

酶活定义：每克样本每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

GCS酶活（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷（V样×W÷V样总）÷T =3215.4×ΔA÷W

3. 按照细菌或细胞数量计算

酶活定义：每104个细胞每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

GCS酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））÷T=3215.4×ΔA÷细胞数量（万个）

4. 按液体体积计算