上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
| 货号：UPLC-MS-4111 | 规格：100T/96S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-4110 | 规格：50T/48S |
可见分光光度法 |
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液 |
液体 50 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂一 |
粉剂×1 支 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×2 瓶 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 试剂一：10 mg葡萄糖。用前加1 mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存两周。
2. 工作液的配制：临用前取1瓶试剂二倒入5.5 mL蒸馏水，缓慢倒入22 mL浓硫酸，充分溶解混匀后使用。用不完的的试剂2-8℃保存一周。
产品说明：
糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，是糖的主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量， 分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度，当血糖升高时可在肝脏合成糖原，血糖降低时，肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此，肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时，肌糖原不能直接分解成血糖，必须先分解产生乳酸，随血液循环到肝脏，通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。
测定原理：蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原，在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。
最低检出限：0.0016 mg/mL
线性范围：0.003125-0.1 mg/mL
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、离心机，可调式移液器、1mL玻璃比色皿、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。
操作步骤
1﹑细胞或细菌：收集500~1000 万细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；加入0.75mL提取液超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；转移至10mL试管中，置于沸水浴中煮沸20min（盖紧， 防止水分散失），隔5min 振摇试管1 次，使充分混匀；取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5mL，混匀，8000g 25℃ 离心10min，取上清待测。
2﹑组织：称取0.1~0.2g样本，置于10mL试管中；加入0.75mL提取液，置于沸水浴中煮沸20min（盖紧，防止水分散失），隔5min振摇试管1次，使充分混匀；待组织全部溶解后，取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5mL，混匀，8000g 25℃离心10min，取上清待测。
二、 测定步骤
1. 分光光度计预热30min 以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2.试剂一稀释：取5μL 10mg/mL葡萄糖标准液，加入995μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.05 mg/mL葡萄糖溶液备用，现用现配。（实验中每管需要250μL，为减小实验误差，故配制大体积。）
3.加样表（在EP 管中反应）
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试剂（μL） |
空白管 |
标准管 |
测定管 |
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待测样本 |
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250 |
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试剂一 |
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250 |
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蒸馏水 |
250 |
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试剂二 |
1000 |
1000 |
1000 |
三、 糖原含量的计算
1、 按照样本质量计算
糖原（mg/g 质量）= (C标准×V1)×(A3 -A1)÷(A2 -A1)÷(W×V1÷V2) ÷1.11= 0.225×(A3 -A1)÷（A2-A1)÷W
2、 按照样本蛋白浓度计算
糖原(mg/mg prot)= (C标准×V1)×(A3 -A1) ÷(A2 -A1) ÷(V1×Cpr) ÷1.11= 0.045×(A3 -A1) ÷（A2-A1) ÷Cpr
3、按照细菌或细胞数量计算
糖原（mg/104 cell）= (C标准×V1)×(A3 -A1)÷(A2 -A1)÷( 细菌或细胞数量×V1÷V2) ÷1.11= 0.225×(A3 -A1)÷（A2-A1)÷细菌或细胞数量
1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，即111μg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于100μg糖原用蒽酮所试剂显示的颜色；C标准：标准管浓度，0.05mg/mL；V1：加入反应体系中糖原提取液体积，0.25mL；V2： 样本总体积，5mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；细菌或细胞数量：以104为单位，万个。注意事项：
如果吸光值大于 0.8，建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。
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