上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
| 货号：UPLC-MS-6024 | 规格：100T/96S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-6023 | 规格：50T/48S | 可见分光光度法 |
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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试剂一 |
液体 5 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂二 |
液体 2 mL×1 瓶 |
-20℃保存 |
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试剂三 |
液体 30 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂四 |
液体 2 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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标准品 |
粉剂×1 支 |
-20℃保存 |
溶液的配制：
标准品：临用前加入 0.8 mL 试剂二，充分溶解，配制成 10 mmol/L DMF 标准液，4℃保存 4 周；取 20µL 10 mmol/L DMF 标准液和 30µL 试剂二混合配制成 4 mmol/L 标准溶液待测。
血清葡萄糖与白蛋白及其它血清蛋白分子 N 末端的氨基发生非酶促糖化反应，形成高分子酮胺结构，在碱性条件下与硝基四氯唑蓝反应，生成紫红色化合物甲臜。在 530nm 波长处比色，测定其 OD 值，与 DMF 标准比较， 即可求得其含量。
需自备的 仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸馏水。
血清（浆）：收集血清（浆）到离心管内，按照血清（浆）体积（mL）∶试剂一体积（mL）= 10∶1 的比例（建议吸取 0.2 mL 血清（浆）于 EP 管中，加入 0.02 mL 试剂一），充分混匀，于 37℃保温 30 min。
1、 可见分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 530 nm，蒸馏水调零。
2、 标准溶液：按照标准溶液体积（mL）∶试剂一体积（mL）= 10∶1 的比例（建议吸取 0.2 mL 4 mmol/L 标准溶液于 EP 管中，加入 0.02 mL 试剂一），充分混匀，于 37℃保温 30 min。
3、 按下表步骤加样：
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试剂名称（μL） |
测定管 |
空白管 |
标准管 |
标准空白管 |
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样本 |
10 |
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蒸馏水 |
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10 |
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标准溶液 |
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10 |
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试剂二 |
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10 |
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试剂三 |
200 |
200 |
200 |
200 |
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37℃显色 15min； |
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试剂四 |
10 |
10 |
10 |
10 |
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充分混匀，取 200 μL 于微量玻璃比色皿或 96 孔板中，于 530 nm 处测定吸光度。分别记为 A 测定、A 空白、A 标准、A 标准空白。ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 标准空白。 |
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注：空白管和标准空白管均只需做 1-2 次。
糖化血清蛋白含量（mmol/L）=C×ΔA 测定÷ΔA 标准×F=4×ΔA 测定÷ΔA 标准×F C：标准溶液浓度，4 mmol/L；F：稀释倍数。
1、显色完成后，应立即加入试剂四；建议一次性不要做太多样本，防止试剂四加入不及时导致测定结果受到影响。
2、如果测定吸光值 A＞1.5 或 ΔA＞1，建议稀释样本后再测定，计算公式中乘以稀释倍数；如果测定吸光值较低或接近空白 OD 值，建议增加操作表中的样本量后再进行测定（空白管、标准管、标准空白管需要增加至相同体积量）。
1、 取 0.2 mL 小鼠血清加入 0.02 mL 试剂一，充分混匀，于 37℃保温 30 min。标准溶液处理同上。按照测定步骤操作，用 96 孔板测定计算 ΔA 测定=A 测定-A 空白=0.252-0.044=0.208，ΔA 标准=A 标准-A 标准空白=0.227- 0.101=0.126，按公式计算小鼠血清中糖化血清蛋白含量：
糖化血清蛋白含量（mmol/L）= C×ΔA 测定÷ΔA 标准=4×0.208÷0.126=6.603 mmol/L。
2、 取 0.2 mL 马血清加入 0.02 mL 试剂一，充分混匀，于 37℃保温 30 min。标准溶液处理同上。按照测定步骤操作，用 96 孔板测定计算 ΔA 测定=A 测定-A 空白=0.1-0.044=0.056，测定 ΔA 标准=A 标准-A 标准空白=0.227- 0.101=0.126，按公式计算血清中糖化血清蛋白含量：
糖化血清蛋白含量（mmol/L）= C×ΔA 测定÷ΔA 标准=4×0.056÷0.126=1.778 mmol/L。
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