上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
| 货号：UPLC-MS-4240 | 规格：100T/48S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-4239 | 规格：50T/24S |
可见分光光度法 |
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液 |
液体 110 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂一 |
粉剂×2 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
液体 35 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
粉剂×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前取 1 瓶加入 20 mL 提取液，充分混匀后沸水浴直至溶解（约 10min），2-8℃保存 4 周；
2、 标准品：10 mg 无水葡萄糖。临用前加 1 mL 提取液溶解为 10 mg/mL 的葡萄糖标准品备用，2-8℃保存两周；
产品说明：
糖化酶，即葡萄糖淀粉酶（EC3.2.1.3），又称γ-淀粉酶。糖化酶是由一系列微生物分泌的，具有外切酶活性的胞外酶，主要作用是从淀粉、糊精、糖原等碳链上的非还原性末端依次水解α-1,4糖苷键，切下一个个葡萄糖单元，对于支链淀粉，当遇到分支点时，它也可以水解α-1,6 糖苷键由此将支链淀粉全部水解成葡萄糖。多应用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有机酸，甘油，淀粉糖等工业中，是我国重要的工业酶制剂之一。
糖化酶将可溶性淀粉生成葡萄糖，碱性条件下，葡萄糖与3,5-二硝基水杨酸共热后生成红棕色化合物，在540nm 处有最大光吸收，在一定范围内葡萄糖的量与反应液颜色深浅成正比，以此测定糖化酶的活力。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、研钵/匀浆器，超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤
3. 培养液或其它液体：直接检测。（若有浑浊则离心后进行测定）
二、测定步骤
1. 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。
2. 标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至 1.5、1.0、0.8、0.4、0.2、0.1mg/mL。
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序号 |
稀释前浓度（mg/mL） |
标准液体积（µL） |
蒸馏水体积（µL） |
稀释后浓度（mg/mL） |
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1 |
10 |
200 |
800 |
2.0 |
|
2 |
2.0 |
150 |
50 |
1.5 |
|
3 |
2.0 |
300 |
300 |
1.0 |
|
4 |
1.0 |
320 |
80 |
0.8 |
|
5 |
0.8 |
200 |
200 |
0.4 |
|
6 |
0.4 |
200 |
200 |
0.2 |
|
7 |
0.2 |
200 |
200 |
0.1 |
实验中每个标准管需50µL 标准溶液。
3. 吸取 50μL 样本于 1.5mLEP 管中沸水浴 5min 作为对照管的灭活样本。
4. 加样表：
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试剂（μL） |
对照管 |
测定管 |
空白管 |
标准管 |
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灭活样本 |
50 |
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样本 |
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50 |
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蒸馏水 |
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50 |
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标准品 |
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|
50 |
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试剂一 |
500 |
500 |
500 |
500 |
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充分混匀，40℃反应20min后沸水浴5min，常温10000g离心10min。 |
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上清液 |
500 |
500 |
500 |
500 |
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试剂二 |
500 |
500 |
500 |
500 |
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混匀，沸水浴5min，流水冷却后，测定540nm处吸光值A，计算ΔA测=A测定管-A对照管，ΔA标=A 标准管-A空白管。标准管和空白管只需做1-2次。 |
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根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标（y，ΔA标），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测（y，ΔA测）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。
2. 酶活性计算：
（1） 按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：在40℃每毫克蛋白每小时产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。糖化酶活性（U/mg prot）=x×V 样总÷（V样总×Cpr ）÷T=3x÷Cpr
（2） 按照样本质量计算
酶活性定义：在40℃每克组织每小时产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。糖化酶活性（U/g 质量）= x×V 样总÷W÷T=3x ÷W
（3） 按照液体体积计算
酶活性定义：在40℃每毫升液体每小时产生1mg葡萄糖所需的酶量为一个酶活力单位。糖化酶活性（U/mL）= x×V 样÷V 样÷T=3x
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到
