酸性蛋白酶(ACP)活性检测试剂盒-酸性蛋白酶(ACP)试剂盒-上海液质



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货号:UPLC-MS-4475 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4474 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 55 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 4mL×1

4℃保存

试剂二

粉剂×1

4℃保存

试剂三

液体 20 mL×1

4℃保存

试剂四

液体 4 mL×1

4℃保存

试剂五

液体 5mL×1

4℃保存

标准品

液体 1 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂二:临用前加入 4 mL 试剂五,沸水浴中搅拌溶解;

2 标准品:20μmol/mL 标准酪氨酸。

产品说明:

ACP 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。酸性条件下,ACP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;钨蓝在680nm 有特征吸收峰,通过测定其吸光度增加,来计算 ACP 活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

研钵/匀浆器、台式离心机、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、1.5 mL EP 管、冰、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称约0.1g组织,加入1mL提取液,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心10min,取上清,即粗酶液,置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品,加入1mL提取液,置冰上待测。

二、测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。

2 试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min以上。

3 标准溶液的配制:临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL  标准溶液使用,现用现配。

4 样本测定(1.5mLEP管中分别加入下列试剂)

取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板中,于680nm测定光吸收,分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管。

三、ACP活性计算

1、按样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:30℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

ACP 酶活(U/mg prot)=C 标准品×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)×V1÷(Cpr×V2)÷T=0.125×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)÷Cpr

2、按样本质量计算

酶活单位定义:30℃每克样本每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。

ACP 酶活(U/g  质量)=C 标准品×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)×V1÷(W×V2÷V3)÷T=0.125×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)÷W

C 标准品:0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液;Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V1:酶促反应总体积,0.1mL;V2:加入反应体系中粗酶液体积,2×10-2 mL;V3:粗酶液总体积,1mL;T:催化反应时间, 10min。

注意事项:

若反应较弱,(A 测定管-A 对照管)差值较小,可适当延长反应时间(20-30min),即第一步水浴时间,最后计算酶活时对公式进行修改。


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