上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4475 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4474 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 55 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 4mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 20 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂四 |
液体 4 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂五 |
液体 5mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 4 mL 试剂五,沸水浴中搅拌溶解;
2、 标准品:20μmol/mL 标准酪氨酸。
ACP 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。酸性条件下,ACP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;钨蓝在680nm 有特征吸收峰,通过测定其吸光度增加,来计算 ACP 活性。
需自备的仪器和用品:
研钵/匀浆器、台式离心机、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、1.5 mL EP 管、冰、蒸馏水。
称约0.1g组织,加入1mL提取液,冰上充分研磨,10000rpm 4℃离心10min,取上清,即粗酶液,置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品,加入1mL提取液,置冰上待测。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至680nm,蒸馏水调零。
2、 试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min以上。
3、 标准溶液的配制:临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL 标准溶液使用,现用现配。
4、 样本测定(1.5mLEP管中分别加入下列试剂)
取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板中,于680nm测定光吸收,分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管。
1、按样本蛋白浓度计算
酶活单位定义:30℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。
ACP 酶活(U/mg prot)=C 标准品×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)×V1÷(Cpr×V2)÷T=0.125×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)÷Cpr
2、按样本质量计算
酶活单位定义:30℃每克样本每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。
ACP 酶活(U/g 质量)=C 标准品×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)×V1÷(W×V2÷V3)÷T=0.125×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)÷W
C 标准品:0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液;Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V1:酶促反应总体积,0.1mL;V2:加入反应体系中粗酶液体积,2×10-2 mL;V3:粗酶液总体积,1mL;T:催化反应时间, 10min。
若反应较弱,(A 测定管-A 对照管)差值较小,可适当延长反应时间(20-30min),即第一步水浴时间,最后计算酶活时对公式进行修改。
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