双缩脲法蛋白质含量检测试剂盒-双缩脲法蛋白质检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4473 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4472 规格:50T/48S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

自备

-

试剂一

液体 20 mL×1

4℃保存

标准品

液体 1 mL×1 支,5

mg/mL

-20℃保存

溶液的配制:

提取液:自备。根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水。

产品说明:

样本可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物;紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。该方法适用于蛋白质浓度高的样本,尤其是动物材料。

技术指标:

最低检出限:0.1718 mg/mL

线性范围:0.25-12 mg/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、离心机、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、液体样本:澄清无色液体样本可以直接测定。

2、组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)冰浴匀浆,10000rpm,4℃离心 10min,取上清,即待测液。(动物样本常常需要稀释)

3、细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到540nm,蒸馏水调零。

2 空白管:取0.5mL EP管,加入40μL蒸馏水,200μL试剂一,混匀后室温静置15min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,540nm比色,记为A空白管。

3 标准管:取0.5mL EP管,加入40μL标准液,200μL试剂一,混匀后室温静置15min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,540nm比色,记为A标准管。

4 测定管:取0.5mL EP管,加入40μL待测液,200μL试剂一,混匀后室温静置15min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,540nm比色,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需测定 1-2 次。

三、样本中蛋白质浓度计算

1、按液体体积计算:

蛋白质(mg/mL)=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)=5÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)

2、按样本质量计算:

蛋白质(mg/g 质量)=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管) × V样总÷W=5÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管) ÷W

3、按细胞数量计算:

蛋白质(mg/104 cell)=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管) × V样总÷500=0.01÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)

C标准管:5mg/mL;V样总:样本总体积,1mL;W:样本质量,g;500:细胞总数,500万。

注意事项:

1 样本蛋白浓度须在0.25~12mg/mL范围内,低于0.25mg/mL不能用此法,高于12mg/mL须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验,确保蛋白浓度在0.25~12mg/mL范围内。

2 如果吸光值大于0.44,则需要将样本用蒸馏水稀释后再测定。

3 待测样本蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰,提取液中应不含这些物质;否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。


上一篇:水样中汞离子(Hg2+)浓度检测试剂盒-水样中汞离子(Hg2+)检测试剂盒
下一篇:食品中亚硝酸盐含量检测试剂盒-食品中亚硝酸盐检测试剂盒-上海液质

独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到

咨询热线
400-998-2324
欢迎关注官方微信
版权所有:上海液质检测技术有限公司    网站备案号:沪ICP备2022005945号
400-998-2324
0.047666s