上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4473 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4472 | 规格:50T/48S | 可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
自备 |
- |
试剂一 |
液体 20 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
液体 1 mL×1 支,5 mg/mL |
-20℃保存 |
溶液的配制:
提取液:自备。根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水。
样本可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物;紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。该方法适用于蛋白质浓度高的样本,尤其是动物材料。
最低检出限:0.1718 mg/mL
线性范围:0.25-12 mg/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、离心机、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、液体样本:澄清无色液体样本可以直接测定。
2、组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)冰浴匀浆,10000rpm,4℃离心 10min,取上清,即待测液。(动物样本常常需要稀释)
3、细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到540nm,蒸馏水调零。
2、 空白管:取0.5mL EP管,加入40μL蒸馏水,200μL试剂一,混匀后室温静置15min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,540nm比色,记为A空白管。
3、 标准管:取0.5mL EP管,加入40μL标准液,200μL试剂一,混匀后室温静置15min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,540nm比色,记为A标准管。
4、 测定管:取0.5mL EP管,加入40μL待测液,200μL试剂一,混匀后室温静置15min,取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,540nm比色,记为A测定管。
三、样本中蛋白质浓度计算
1、按液体体积计算:
蛋白质(mg/mL)=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)=5÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)
2、按样本质量计算:
蛋白质(mg/g 质量)=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管) × V样总÷W=5÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管) ÷W
3、按细胞数量计算:
蛋白质(mg/104 cell)=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管) × V样总÷500=0.01÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管)
C标准管:5mg/mL;V样总:样本总体积,1mL;W:样本质量,g;500:细胞总数,500万。
1、 样本蛋白浓度须在0.25~12mg/mL范围内,低于0.25mg/mL不能用此法,高于12mg/mL须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验,确保蛋白浓度在0.25~12mg/mL范围内。
2、 如果吸光值大于0.44,则需要将样本用蒸馏水稀释后再测定。
3、 待测样本蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰,提取液中应不含这些物质;否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。
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