上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号：UPLC-MS-4248
规格：100T/96S
微量法
货号：UPLC-MS-4247
规格：50T/24S
可见分光光度法
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液 |
液体 60 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂一 |
粉剂×5 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
液体 12mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂三 |
液体 12mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂四 |
粉剂×5 支 |
-20℃保存 |
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试剂五 |
液体 55 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
粉剂×1 支 |
-20℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂一：取 10 mL 试剂五加入 1 瓶试剂一粉剂中溶解，再加入一支试剂四，现用现配，24 h 变质；
2、 标准品：临用前加入 1.4 mL 蒸馏水，即 10 μmol/mL NADH 标准品。-20℃保存 4 周，避免反复冻融。
产品说明：SDH（EC 1.1.1.14）催化山梨醇脱氢生成果糖，是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之一。SDH 催化山梨醇脱氢生成果糖，同时还原 NAD+生成 NADH，生成的 NADH 能将电子传递给 NBT 生成紫色的甲臜，根据这一原理可以计算 SDH 活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声破碎仪，1mL玻璃比色皿、研钵/ 匀浆器、冰和蒸馏水。操作步骤：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例加入提取液（建议 500 万细菌或细胞加入 1 mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000×g 4℃离心 10 min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1 mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000 ×g 4℃离心 10 min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样本：直接检测。
二、测定步骤
1、可见分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 570 nm，蒸馏水调零。
2、标准管的测定：将 10 μmol/mL NADH 标准品用水稀释至 1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3 μmol/mL 的标准溶液
（1） 标准品稀释表
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序号 |
稀释前浓度（µmol/mL） |
标准液体积（µL） |
蒸馏水体积（µL） |
稀释后浓度（µmol/mL） |
|
1 |
10 |
100 |
900 |
1 |
|
2 |
1 |
180 |
20 |
0.9 |
|
3 |
1 |
160 |
40 |
0.8 |
|
4 |
1 |
140 |
60 |
0.7 |
|
5 |
1 |
120 |
80 |
0.6 |
|
6 |
1 |
100 |
100 |
0.5 |
|
7 |
1 |
80 |
120 |
0.4 |
|
8 |
1 |
60 |
140 |
0.3 |
实验中每个标准管需 100µL 标准溶液。
（2） 标准品测定表
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试剂名称(μL) |
标准管 |
空白管 |
|
标准溶液 |
100 |
- |
|
蒸馏水 |
- |
100 |
|
试剂二 |
150 |
150 |
|
试剂三 |
150 |
150 |
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试剂一 |
600 |
600 |
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混匀后室温避光放置 20 min，之后分别测定标准管和空白管在 570 nm 下的吸光度，记为A 标准管、A 空 白管，计算 ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。标准曲线只需做 1-2 次。 |
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3、样本的测定：
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试剂名称(μL) |
测定管 |
|
样本 |
100 |
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试剂二 |
150 |
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试剂三 |
150 |
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试剂一 |
600 |
将上述试剂按顺序加 1 mL 玻璃比色皿中，加样本的同时开始计时，记录 10 秒时的初始吸光度 A1
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