上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
| 货号：UPLC-MS-4115 | 规格：100T/96S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-4114 | 规格：50T/24S |
可见分光光度法 |
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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试剂一 |
液体 15 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
液体 15 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
粉剂 10 mg×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、标准品：临用前将标准品用 1mL 蒸馏水溶解，配制成浓度为 10 mg/mL 的标准液待用，2-8℃可保存 2 周。
产品说明：
山梨醇广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是糖运输形式之一，而且与生物抗逆性和食物风味密切相关。因此，在糖代谢、抗逆性和食品研究中经常需要检测山梨醇含量变化。山梨醇在碱性溶液中与铜离子形成蓝色络合物，在 655nm 波长有特征吸收峰。
技术指标：
最低检出限：0.0261 mg/mL
线性范围：0.0625-4 mg/mL
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤
称取约 0.2g 样本，加入 2mL 蒸馏水，研磨成匀浆，置沸水浴中煮沸 10 分钟（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，8000g，常温离心 10min，取上清液待测。
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 655nm，蒸馏水调零。
2、 标准溶液的制备：临用前将 10mg/mL 标准液用蒸馏水稀释至 4、2、1、0.5、0.25、0.125、0（空白管）mg/mL标准溶液待测。
3、 标准液稀释可参考下表。
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序号 |
稀释前浓度（mg/mL） |
标准液体积（µL） |
蒸馏水体积（µL） |
稀释后浓度（mg/mL） |
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1 |
10 |
800 |
1200 |
4 |
|
2 |
4 |
1000 |
1000 |
2 |
|
3 |
2 |
1000 |
1000 |
1 |
|
4 |
1 |
1000 |
1000 |
0.5 |
|
5 |
0.5 |
1000 |
1000 |
0.25 |
|
6 |
0.25 |
1000 |
1000 |
0.125 |
|
7 |
0 |
0 |
1000 |
0（空白管） |
4、 样本测定（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：
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试剂（μL） |
标准管 |
测定管 |
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试剂一 |
150 |
150 |
|
试剂二 |
140 |
140 |
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样本 |
- |
1000 |
|
标准液 |
1000 |
- |
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涡旋混匀，室温静置 15min，8000g，常温离心 10min，取 1mL 上清液测 655nm 下吸光值A，分别记为A 标准、A 测定、A 空白。ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 空白。标准曲线和空白管只需测 1-2 次。 |
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1、根据标准管的浓度（y，mg/mL）和吸光度 A（x，ΔA 标准），建立标准曲线。
根据标准曲线，将 A 测定（x，ΔA 测定）带入公式计算样本浓度（y，mg/mL）。
2、按照样本质量计算
山梨醇含量（mg/g 质量）=y×V1÷(W×V1÷V2)=2×y÷W
3、按照样本蛋白浓度计算
山梨醇含量（mg/mg prot）=y×V1÷(V1×Cpr)=y÷Cpr
V1：加入样本体积，1mL；V2：加入蒸馏水体积，2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。计算公式中注意乘以稀释倍数。
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