葡萄糖氧化酶(GOD)活性检测试剂盒-葡萄糖氧化酶(GOD)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4531 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4530 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 60 mL×1

2-8℃保存

试剂一

液体 40 mL×1

2-8℃保存

试剂二

液体 8 mL×1

2-8℃保存

试剂三

液体 1 mL×2

-20℃保存

溶液的配制:

1 工作液的配制:取 20 mL 试剂一和 4 mL 试剂二混匀(现配现用);

2 试剂三:融化后可分装-20℃保存。

产品说明:

GODEC 1.1.3.4广泛存在于动物和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生H2O2,是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。

GOD催化葡萄糖氧化产生H2O2,过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质,颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

          一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

(1) 组织处理:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

(2) 细菌、细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎(功率 20% 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。

(3) 血清(浆):直接检测。

二、测定步骤

1 分光光度计预热30min以上,调节波长至500nm,蒸馏水调零。

2 加样表:

试剂名称(μL

测定管

GOD工作液

870

试剂三

30

混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min

样本

100

样本测定前将 GOD 工作液与试剂三放入 37℃水浴中保温,然后将上述试剂按顺序加入 1mL 玻璃比色皿中, 加样本的同时开始计时;在 500nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 2 小时 20 秒时的吸光度 A2。计算ΔA=A2-A1。

三、GOD 活力单位的计算

(1) 按蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V 样)÷T= 666.67×ΔA÷Cpr

(2) 按样本质量计算

单位的定义:每g组织在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W÷V 提取×V 样)÷T= 666.67×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞数量计算

单位的定义:每1万细菌或细胞在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(500÷V 提取×V 样)÷T= 1.333×ΔA÷W

(4) 按血清(浆)体积计算

单位的定义:每mL血清(浆)在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷V 样÷T= 666.67×ΔA

V反总:反应总体积,1mL;V样:加入样本体积,0.1mL;V提取:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞数量,500万;d:光径,1cm;ε:氧化型邻联茴香胺消光系数,7.5×10 -3mL/μmol/cm;T:反应时间,2小时。

注意事项:

1、不同匀浆组织中 GOD 活力不一样,做正式试验之前请做 1-2 次预实验,若 A2-A1>0.8,则说明组织活力太高, 必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液,使 A2-A1<0.8,以提高检测灵敏度。实验过程中若出现 A1> A2 现象请将样本用提取液稀释成适当浓度。

2、最好两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。


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