上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4531 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4530 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 60 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂一 |
液体 40 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂二 |
液体 8 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂三 |
液体 1 mL×2 支 |
-20℃保存 |
溶液的配制:
1、 工作液的配制:取 20 mL 试剂一和 4 mL 试剂二混匀(现配现用);
2、 试剂三:融化后可分装-20℃保存。
GOD(EC 1.1.3.4)广泛存在于动物和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生H2O2,是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。
GOD催化葡萄糖氧化产生H2O2,过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质,颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
(1) 组织处理:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
(2) 细菌、细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清,按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎(功率 20%或 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。
(3) 血清(浆):直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至500nm,蒸馏水调零。
2、 加样表:
试剂名称(μL) |
测定管 |
GOD工作液 |
870 |
试剂三 |
30 |
混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min |
|
样本 |
100 |
单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V 样)÷T= 666.67×ΔA÷Cpr
(2) 按样本质量计算
单位的定义:每g组织在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W÷V 提取×V 样)÷T= 666.67×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞数量计算
单位的定义:每1万细菌或细胞在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(500÷V 提取×V 样)÷T= 1.333×ΔA÷W
(4) 按血清(浆)体积计算
单位的定义:每mL血清(浆)在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。
GOD(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×V反总÷V 样÷T= 666.67×ΔA
V反总:反应总体积,1mL;V样:加入样本体积,0.1mL;V提取:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞数量,500万;d:光径,1cm;ε:氧化型邻联茴香胺消光系数,7.5×10 -3mL/μmol/cm;T:反应时间,2小时。
1、不同匀浆组织中 GOD 活力不一样,做正式试验之前请做 1-2 次预实验,若 A2-A1>0.8,则说明组织活力太高, 必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液,使 A2-A1<0.8,以提高检测灵敏度。实验过程中若出现 A1> A2 现象请将样本用提取液稀释成适当浓度。
2、最好两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。
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