葡萄糖含量检测试剂盒-葡萄糖检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4105 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4104 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。


试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 10mL×1

2-8℃保存

试剂二

液体 25 mL×1

2-8℃保存

试剂三

液体 25 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、混合试剂的配制:使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合,用多少配多少;

2、试剂一:1μmol/mL 葡萄糖溶液。

产品说明:

葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物,而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言,葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源,而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。

葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,GOD)催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶(Peroxidase POD)催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。

技术指标:

最低检出限:0.0078 μmol/mL

线性范围:0.0625-3 μmol/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/ 匀浆器、蒸馏水。


一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1. 组织的处理:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL 蒸馏水),研磨成匀浆,置沸水浴中煮沸 10 min(盖紧,防止水分散失),冷却至室温后,8000g,25℃离 10min,取上清液备用。

2. 细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 蒸馏水),超声波破碎细菌或细胞(冰浴, 功率200W,超声3 s,间隔10 s,重复30次),置沸水浴中煮沸10min(盖紧,防止水分散失),冷却至室温后, 8000g,25℃离心10min,取上清液备用。

二、测定步骤

1 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 505nm,蒸馏水调零。

2 样本测定(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):

试剂(μL

空白管

标准管

测定管

样本

 

 

100

试剂一

 

100

 

蒸馏水

100

 

 

混合试剂

900

900

900

涡旋混匀,置于 37℃(哺乳动物)水浴锅/恒温培养箱或 25℃(其它物种)水浴锅中保温 15min 后,于 505nm 波长处读取吸光度A,分别记为 A 空白、A 标准和A 测定。计算 ΔA 测定=A 测定-A 空白,ΔA 标准=A 标准-A 空白。(空白管和标准管只需测 1-2 次)。

三、葡萄糖含量计算

1、按蛋白浓度计算

葡萄糖含量(µmol/mg prot)= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷(Cpr×V 样)=ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr 

2、按样本质量计算

葡萄糖含量(µmol/g 质量)= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷(W÷V 样总×V 样)= ΔA 测定÷ΔA 标准 ÷W

 3、按细菌或细胞数量计算

葡萄糖含量(µmol/104 cell)= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷(500÷V 样总×V 样)= 0.002×ΔA 测定÷ΔA 标准

C:葡萄糖溶液浓度,1µmol/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;V 样:加入的样本体积,100µL=0.1mL;V 样总:样本总体积,1mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞数量,500 万。

如果样本吸光值大于1.3,建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。计算公式中注意乘以稀释倍数。


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