上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4105 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4104 | 规格:50T/24S | 可见分光光度法 |
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
液体 10mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂二 |
液体 25 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂三 |
液体 25 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、混合试剂的配制:使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合,用多少配多少;
2、试剂一:1μmol/mL 葡萄糖溶液。
产品说明:葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物,而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言,葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源,而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。
葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase,GOD)催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生过氧化氢;过氧化物酶(Peroxidase, POD)催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。
技术指标:
最低检出限:0.0078 μmol/mL
线性范围:0.0625-3 μmol/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/ 匀浆器、蒸馏水。
1. 组织的处理:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL 蒸馏水),研磨成匀浆,置沸水浴中煮沸 10 min(盖紧,防止水分散失),冷却至室温后,8000g,25℃离心 10min,取上清液备用。
2. 细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 蒸馏水),超声波破碎细菌或细胞(冰浴, 功率200W,超声3 s,间隔10 s,重复30次),置沸水浴中煮沸10min(盖紧,防止水分散失),冷却至室温后, 8000g,25℃离心10min,取上清液备用。
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 505nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定(在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂):
试剂(μL) |
空白管 |
标准管 |
测定管 |
样本 |
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100 |
试剂一 |
|
100 |
|
蒸馏水 |
100 |
|
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混合试剂 |
900 |
900 |
900 |
涡旋混匀,置于 37℃(哺乳动物)水浴锅/恒温培养箱或 25℃(其它物种)水浴锅中保温 15min 后,于 505nm 波长处读取吸光度A,分别记为 A 空白、A 标准和A 测定。计算 ΔA 测定=A 测定-A 空白,ΔA 标准=A 标准-A 空白。(空白管和标准管只需测 1-2 次)。
1、按蛋白浓度计算
葡萄糖含量(µmol/mg prot)= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷(Cpr×V 样)=ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr
2、按样本质量计算
葡萄糖含量(µmol/g 质量)= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷(W÷V 样总×V 样)= ΔA 测定÷ΔA 标准 ÷W
3、按细菌或细胞数量计算
葡萄糖含量(µmol/104 cell)= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷(500÷V 样总×V 样)= 0.002×ΔA 测定÷ΔA 标准
C:葡萄糖溶液浓度,1µmol/mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;V 样:加入的样本体积,100µL=0.1mL;V 样总:样本总体积,1mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞数量,500 万。
如果样本吸光值大于1.3,建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。计算公式中注意乘以稀释倍数。
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