上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4190	规格：100T/48S	微量法
货号：UPLC-MS-4189	规格：50T/24S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂三：临用前用 8 mL 蒸馏水溶解备用。

2、 试剂四：临用前用 8 mL 蒸馏水溶解备用。

3、 标准品：10 μmol/mL 磷标准液。临用前用蒸馏水稀释 16 倍至 0.625 μmol/mL 的标准溶液备用。

4、 工作液的配制：试剂二中加入 5 mL 试剂一充分溶解备用。可以将工作液分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

5、 定磷试剂的配制：按 H₂O:试剂三:试剂四:试剂五（V:V:V:V）=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

产品说明：

葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）是一种水解磷酸化合物的磷酸酶，广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。

G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和无机磷，利用钼蓝法测定无机磷含量的增加，即可反映G6P活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2、 操作表：在1.5ml EP管中进行下列操作：

三、G6P 活性计算

1、血清（浆）G6P活力计算

单位定义：每mL血清（浆）每分钟生成1nmol无机磷定义为一个酶活力单位。G6P（U/mL）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×1000×V酶促÷V样本÷T=312.5×ΔA÷ΔA标准

2、组织、细菌或细胞中G6P活力计算

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol无机磷定义为一个酶活力单位。

G6P（U/mg prot）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×1000×V酶促÷（Cpr×V样本）÷T=312.5×ΔA÷ΔA标准÷Cpr

（2） 按样本质量计算：

单位定义：每g组织每分钟生成1nmol无机磷定义为一个酶活力单位。

G6P（U/g 质量）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×1000×V酶促÷（W÷V提取×V样本）÷T=312.5×ΔA÷ΔA标准÷W

（3） 按细菌或细胞数量计算：

单位定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol无机磷定义为一个酶活力单位。

G6P（U/104 cell）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×1000×V酶促÷（500÷V提取×V样本）÷T=0.625×ΔA÷ΔA标准

C标准：标准溶液浓度，0.625μmol/mL；V酶促：酶促反应总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.04mL； V提取：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500： 细菌或细胞总数，500万；1000：单位换算系数，1μmol=1000nmol。