上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4461	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-4460	规格：50T/24S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 2.5 mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；

2、 试剂三：临用前加入 4 mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；

3、 试剂四：临用前加入 5 mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂可分装-20℃保存，避免反复冻融。

4、 工作液的配制：首先将试剂三和试剂四配成溶液，临用前根据用量按照试剂一（V）：试剂二（V）：试剂三（V）=1.6（mL）：0.2（mL）：0.15（mL）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少）

产品说明：

ProDH是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

ProDH催化脯氨酸脱氢生成延丙酮酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的下降，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表ProDH 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、匀浆器/研钵、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）：提取液一体积(mL)为 1：5~10  的比例（建议称取约 0.1g  样本，加入 1mL 提取液一），进行冰浴匀浆，1500g 4℃离心 15min，取上清液于一支新的 EP  管中，加入 10μL 提取液二，涡旋混匀，冰浴放置 30min 后，15000g 4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

2、细胞或细菌：按照细胞数量（104 个）：提取液一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液一），冰浴匀浆，1500g 4℃离心 15min，取上清液于一支新的 EP  管中，加入 10μL 提取液二，涡旋混匀，冰浴放置 30min 后，15000g 4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至600nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、 工作液置于 37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴 5min。

3、 加样表（在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入下列试剂）

三、ProDH酶活计算

A、按微量玻璃比色皿计算

1、按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.01为一个酶活力单位。

ProDH（U/mg prot）=ΔA÷0.01×V反总÷（V样×Cpr）÷T =333.33×ΔA÷Cpr

2、按样本质量计算：

单位定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.01为一个酶活力单位。

ProDH（U/g 质量）=ΔA÷0.01×V 反总÷(W× V样÷V样总)÷T =333.33×ΔA÷W

3、按细胞数量计算：

单位定义：每分钟每1万个细胞在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.01为一个酶活力单位。

ProDH（U/104 cell）=ΔA÷0.01×V  反总÷(500× V样÷V样总)÷T =0.67×ΔA

V反总：反应体系总体积，0.2mL；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，3min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：500万个细胞。

B、按96孔板计算

1、按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每分钟每mg组织蛋白在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。

ProDH（U/mg prot）=ΔA÷0.005×V反总÷（V样×Cpr）÷T =666.67×ΔA÷Cpr

2、按样本质量计算：

单位定义：每分钟每g组织在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。

ProDH（U/g 质量）=ΔA÷0.005×V 反总÷(W× V样÷V样总)÷T =666.67×ΔA÷W

3、按细胞数量计算：

单位定义：每分钟每1万个细胞在每mL反应体系中使600nm处吸光值变化0.005为一个酶活力单位。