上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4439 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4438 | 规格:50T/24S |
可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 110 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 35 mL×1 瓶(自备) |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 35 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1. 试剂一:自备冰乙酸。
2. 标准品:脯氨酸 10 mg,临用前加入 1 mL 蒸馏水,配成 10 mg/mL 标准品。
脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内 Pro 含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。
用磺基水杨酸(SA)提取 Pro,加热处理后,Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色,在 520nm 测定吸光度。
最低检出限:0.2876 μg/mL
线性范围:0.5-40 μg/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰乙酸、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
1、细胞、细菌或组织样本的制备:
细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),之后置沸水浴振荡提取 10min;10000g,常温离心 10min,取上清,冷却后待测。
组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取 10min,10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。
2、血清(浆)样本:取 0.1mL 血清(浆)加入 0.9mL 提取液,充分混匀,之后置沸水浴振荡提取 10 分钟,10000g, 常温离心 10 分钟,取上清,冷却后待测。
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 520nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、 标准品的处理:将标准品用蒸馏水稀释为 40、20、10、8、4、2、1、0.5μg/mL。
3、 操作表:
试剂名称(mL) |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
上清液 |
0.25 |
-- |
- |
标准品 |
- |
0.25 |
- |
蒸馏水 |
- |
- |
0.25 |
试剂一 |
0.25 |
0.25 |
0.25 |
试剂二 |
0.25 |
0.25 |
0.25 |
混匀后盖紧盖子,缠好封口膜,置于沸水浴中保温 30min,每 10min 振荡一次,冷却后吸取 0.2mL 于比色皿或者 96 孔板中在 520nm 波长处比色,记录吸光值 A 测定管、A 标准管、A 空白管,计算 ΔA=A 测定管-A 空白管,ΔA标准=A 标准管-A 空白管。空白管只需做 1-2 次。 |
1、 以标准溶液浓度为横坐标,ΔA标准为纵坐标绘制标准曲线,得到线性回归方程y=kx+b,将ΔA代入方程得到x(μg/mL)。
2、 按照细菌、细胞数量计算
细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/104 cell)=x×V 提÷细胞/细菌数量= x÷细胞/细菌数量
3、 按照组织质量计算
Pro 含量(μg/g 质量) =x×V 提÷W=x÷W
4、 按照血清(浆)体积计算
Pro 含量(μg/mL)=10×x
V 提:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;细胞/细菌数量:以 104 为单位,万个;10:血清稀释倍数,(0.1+0.9)÷0.1=10。
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