脯氨酸(Pro)含量检测试剂盒-脯氨酸(Pro)检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4439 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4438 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 110 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 35 mL×1 瓶(自备)

4℃保存

试剂二

液体 35 mL×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

1. 试剂一:自备冰乙酸。

2. 标准品:脯氨酸 10 mg,临用前加入 1 mL 蒸馏水,配成 10 mg/mL 标准品。

产品说明:

脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内 Pro 含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

用磺基水杨酸(SA)提取 Pro,加热处理后,Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色,在 520nm 测定吸光度。

技术指标:

最低检出限:0.2876 μg/mL

线性范围:0.5-40 μg/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰乙酸、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、细胞、细菌或组织样本的制备:

细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),之后置沸水浴振荡提取 10min;10000g,常温离 10min,取上清,冷却后待测。

组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取 10min,10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。

2、血清(浆)样本:取 0.1mL 血清(浆)加入 0.9mL 提取液,充分混匀,之后置沸水浴振荡提取 10 分钟,10000g 常温离心 10 分钟,取上清,冷却后待测。

二、 测定步骤

1 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 520nm,分光光度计用蒸馏水调零。

2 标准品的处理:将标准品用蒸馏水稀释为 40、20、10、8、4、2、1、0.5μg/mL。

3 操作表:

试剂名称(mL

测定管

标准管

空白管

上清液

0.25

--

-

标准品

-

0.25

-

蒸馏水

-

-

0.25

试剂一

0.25

0.25

0.25

试剂二

0.25

0.25

0.25

混匀后盖紧盖子,缠好封口膜,置于沸水浴中保温 30min,每 10min 振荡一次,冷却后吸取 0.2mL 于比色皿或者 96 孔板中在 520nm 波长处比色,记录吸光值 A 测定管、A 标准管、A 空白管,计算 ΔA=A 测定管-A 空白管,ΔA标准=A 标准管-A 空白管。空白管只需做 1-2 次。

三、Pro 含量计算

1 以标准溶液浓度为横坐标,ΔA标准为纵坐标绘制标准曲线,得到线性回归方程y=kx+b,将ΔA代入方程得到x(μg/mL)。

2 按照细菌、细胞数量计算

细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/104 cell)=x×V 提÷细胞/细菌数量= x÷细胞/细菌数量

3 按照组织质量计算

Pro 含量(μg/g 质量) =x×V 提÷W=x÷W

 4 按照血清(浆)体积计算

Pro 含量(μg/mL)=10×x

V 提:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g;细胞/细菌数量:以 104 为单位,万个;10:血清稀释倍数,(0.1+0.9)÷0.1=10。

注意事项:

1. 提取液中含有蛋白沉淀剂,提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。

2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定


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