上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4521 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4520 | 规格:50T/24S | 可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 60 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 10 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 A |
液体 0.4 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 B |
液体 1.6 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂四 |
液体 2 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前加 3mL 蒸馏水充分溶解;
2、 试剂三:临用前将 A 液倒入 B 液中混合,待用;
3、 标准品:1mg/mL 氮标准液。用蒸馏水稀释至 2μg/mL 备用。
脲酶(UE)广泛分布于植物的种子中,也存在于动物的血液和尿液中,某些微生物也能分泌脲酶。UE能够水解尿素产生氨和碳酸,对尿素转化起关键作用。利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N来反应UE活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、天平、研钵/匀浆器、低温离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5-10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液),冰上匀浆后于 4℃,12000g 离心 15min,取上清待测。
2、细胞/细菌:按照细胞/细菌数量(104 个):提取液体积(mL)为 500-1000:1 的比例(建议 500 万个细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎(功率 300w,超声 3 s,间隔 7 s,总时间 3min);然后 4℃,12000g 离心 15min,取上清置于冰上待测。
3、血清(浆)或其它液体:直接检测。
1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至630nm,可见分光光度计蒸馏水调零。
2、 加样表:
试剂名称(μL) |
空白管 |
标准管 |
测定管 |
对照管 |
样本 |
|
|
20 |
20 |
蒸馏水 |
- |
|
|
40 |
试剂一 |
- |
- |
40 |
- |
试剂二 |
- |
- |
80 |
80 |
充分混匀,于37℃反应1h,于EP管中或者96孔板中加入下列溶液 |
||||
反应混合液 |
- |
- |
80 |
80 |
蒸馏水 |
80 |
- |
|
|
标准液 |
- |
80 |
|
|
试剂三 |
16 |
16 |
16 |
16 |
试剂四 |
12 |
12 |
12 |
12 |
混匀,室温静置20min |
||||
蒸馏水 |
92 |
92 |
92 |
92 |
充分混匀后测定 630nm 处吸光值,记为 A 空白管、A 标准管、A 测定管和 A 对照管。计算 ΔA 标准=A 标准管-A 空白管,ΔA 测定=A 测定管-A 对照管。 |
1、液体中UE活力的计算:
单位的定义:每mL血清(浆)每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。UE(U/mL)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V酶促÷V样÷T=0.233×ΔA测定÷ΔA标准
2、组织、细菌或细胞中UE活力的计算:
(1) 按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力(U/mg prot)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V酶促÷(V样×Cpr)÷T =0.233×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
(2) 按样本质量计算:
单位的定义:每g组织每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力(U/g 质量)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V酶促÷(W× V样÷V提取)÷T=0.233×ΔA测定÷ΔA标准÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1百万个细菌或细胞每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。UE活力(U/106 cell)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V酶促÷(细胞数量×V样÷V提取) ÷T=0.233×ΔA测定÷ΔA标准÷细胞数量
C标准液:标准液浓度,2 μg/mL;T:反应时间,60min;V酶促:酶促反应体系总体积,0.14mL;V样:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V提取:提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g; 细胞数量:以百万计。
ΔA测定大于0.6时,建议将反应混合液用蒸馏水稀释或者样本用蒸馏水稀释后在进行测定。
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