尿酸酶活性检测试剂盒-尿酸酶试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4559 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4558 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 60 mL×1

2-8℃保存

试剂一

液体 30 mL×1

2-8℃保存

试剂二

粉剂×2

2-8℃保存

试剂三

粉剂×1

2-8℃保存

试剂四

粉剂×1

2-8℃保存

试剂五

粉剂×1

-20℃保存

试剂六

液体 6 mL×1

2-8℃保存

标准品

液体 102 μL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1 试剂二:临用前取 1 瓶加入 2 mL 试剂一,充分混匀后备用;用不完的试剂 2-8℃保存 1 周。

2 试剂三:临用前加入 6 mL 试剂一,充分混匀后备用;用不完的试剂 2-8℃保存 4 周。

3 试剂四:临用前加入 4 mL 试剂一,充分混匀后备用;用不完的试剂 2-8℃保存 4 周。

4 试剂五:粉剂置于瓶内玻璃管中。临用前加入 6 mL 试剂一,充分混匀后备用;用不完的试剂-20℃分装保存 4 周,避免反复冻融。

5 标准品:临用前加入 898 µL 蒸馏水得到 1 mmol/mL 的过氧化氢溶液,2-8℃保存 4 周。

6 工作液 A 的配制:用于样本测定管、空白管及标准管的检测,按照试剂二 : 试剂三 : 试剂四 :试剂五 : 试剂六= 1 : 1 : 1 : 1 : 2 的比例配制,根据样本量现配现用,配后建议 2 小时内用完。

7 工作液 B 的配制:用于样本对照管的检测,按照试剂二 : 试剂三 : 试剂四 : 试剂五 : 试剂一= 1 : 1 : 1 :1 : 2 的比例配制,根据样本量现配现用,配后建议 2 小时内用完。

产品说明:

尿酸酶,又名尿酸氧化酶,是一种参与嘌呤降解途径的氧化酶,可以将尿酸分解为尿囊酸素进而排出体外。尿酸为嘌呤代谢的终末产物,积累过多将导致通风、肾病、心血管疾病等多种疾病的发生。尿酸酶在尿酸相关疾病的临床检测以及治疗中有着重要意义。

尿酸酶催化尿酸分解为尿囊素、CO2  H2O2H2O2 氧化亚铁氰化钾中的 Fe2+生成Fe3+Fe3+进一步与 4-氨基安替比林和酚反应生成红色醌类化合物,在 505 nm 处有特征吸收峰,通过测定 505 nm 处的吸光值来反映尿酸酶的活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96 孔板、超声破碎仪、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、EP 管、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

组织:按照组织质量(g)︰提取液体积(mL) 1︰5~10 的比例(建议称取约 0.1 g 组织,加入 1 mL 提取液) 进行冰浴匀浆,然后 10000 rpm,4℃,离心 10 min,取上清置于冰上待测。

细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个): 提取液体积(mL 为 500~1000 : 1 的比例(建议 500 万个细菌或细胞加入 1 mL 提取液),冰浴超声波破碎细菌或细胞(功率 200 W,超声 3 s,间隔 7 s,总时间 5 min);然后 10000 rpm,4℃,离心 10 min,取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长至 505 nm,分光光度计用蒸馏水调零。

2 1 mmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为 0.5 µmol/mL 的标准溶液备用。标准溶液的稀释:取 20μL 1mmol/mL 过氧化氢标准液,加入 1980μL 蒸馏水,充分混匀,配制成 10μmol/mL 标准液,再取 50μL 1mmol/mL 过氧化氢标准液,加入 950μL 蒸馏水,充分混匀,配制成 0.5μmol/mL 标准液使用,现用现配。(实验中每管需要 30μL 为减小实验误差,故配制大体积)。

3 操作表:( 1.5 mL 离心管/96 孔板中)

试剂名称(µL

对照管

测定管

标准管

空白管

样本

30

30

-

-

标准溶液

-

-

30

-

蒸馏水

-

-

-

30

工作液 A

-

170

170

170

工作液 B

170

-

-

-

混匀,37℃(哺乳动物) 25℃(其他物种)恒温培养箱中准确反应 30 min。于微量玻璃比色皿/96 孔板, 测定 505nm 处吸光值 A,分别记为 A 对照管、A 测定管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照

管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管,标准管和空白管只需测 1-2 次。

三、尿酸酶活性计算

           (1) 按样本质量计算

酶活定义:在 pH 8.8 的条件下,每克样本每小时分解尿酸产生 1 μmol H2O2 定义为一个酶活力单位。尿酸酶酶活(U/g 质量)= ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 样本÷(W×V 样本÷V 提取)÷T= ΔA 测定÷ΔA 标准÷W

(2) 按蛋白浓度计算

酶活定义:在 pH 8.8 的条件下,每毫克蛋白每小时分解尿酸产生 1 μmol H2O2 定义为一个酶活力单位。尿酸酶酶活(U/mg prot)= ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 样本÷(Cpr×V 样本)÷T= ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr

(3) 按照细菌数量或细胞计算

酶活定义:在 pH8.8 的条件下,每 104 个细菌或细胞每小时分解尿酸产生 1 μmol   H2O2 定义为一个酶活力单位。

尿酸酶酶活(U/104 cell)= ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 样本÷(细菌数量(万个)×V 样本÷V 提取)÷T=ΔA 测定÷ΔA 标准÷细菌数量(万个)

C 标准:标准溶液浓度,0.5 µmol/mL;V 样本:加入的样本体积,0.03 mL;V 提取:提取液体积,1 mL;T 酶促反应时间:0.5 h;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

注意事项:

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