酪氨酸解氨酶(TAL)活性检测试剂盒-酪氨酸解氨酶(TAL)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4455 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4454 规格:50T/48S 紫外分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 100 mL×1

2-8℃保存

试剂一

液体 20 mL×1

2-8℃保存

试剂二

粉剂×2

2-8℃保存

溶液的配制:

试剂二:临用前取 1 瓶加入 2.8 mL 蒸馏水和 11 μL HCl 充分溶解待用。现配现用。2-8℃保存 4 周。

产品说明:

酪氨酸解氨酶(TAL)广泛存在于植物和微生物中,是苯丙氨酸次生代谢途径的关键酶之一。TAL能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)直接将酪氨酸转化为香豆酸,香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。

TAL能够分解酪氨酸产生香豆酸,其在310nm下有吸收峰,根据吸光度的变化率可计算出TAL活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研   钵/匀浆器、细胞超声破碎仪、冰、浓盐酸和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、细胞或细菌:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。12000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上,波长调至310nm,紫外分光光度计蒸馏水调零。

2 加样表(在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入)

试剂一

140

试剂二

40

样本

20

 将上述试剂分别加入微量石英比色皿/96  UV 板后迅速吹打混匀,记录第 10s 的吸光值 A1,迅速置于 37℃(哺乳动物) 25℃(其他物种)水浴或培养箱中 3min,拿出迅速擦干测定 3min10s 时的吸光值 A2,计算ΔA=A2-A1。

三、TAL 酶活计算

A、按微量石英比色皿计算:

1、按蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟在310nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活性单位。

TAL(U/mg prot)=ΔA÷0.01×V反总÷(V样×Cpr)÷T =333×ΔA÷Cpr 2、按样本质量计算:

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟在310nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活性单位。

TAL(U/g 质量)=ΔA÷0.01×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T =333×ΔA÷W

3、按细胞或细菌数量计算:

单位的定义:每104个细胞或细菌在反应体系中每分钟在310nm下吸光度变化0.01定义为一个酶活性单位。

TSL(U/104 cell)=ΔA÷0.01×V反总÷(500÷V提取×V样)÷T =0.667×ΔA

V反总:反应总体积,0.2mL;V样:加入的样本体积,0.02mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量, g;V提取:提取液体积,1mL;500:500万个细胞;T:反应时间,3min。

B、按96UV板计算:

1、按蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟在310nm下吸光值变化0.005定义为一个酶活性单位。

TAL(U/mg prot)=ΔA÷0.005×V反总÷(V样×Cpr)÷T=667×ΔA÷Cpr 

2、按样本质量计算:

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟在310nm下吸光值变化0.005定义为一个酶活性单位。

TAL(U/g 质量)=ΔA÷0.005×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=667×ΔA÷W

3、按细胞或细菌个数计算:

单位的定义:每104个细胞或细菌在反应体系中每分钟在310nm下吸光度变化0.005定义为一个酶活性单位。

TAL(U/104 cell)=ΔA÷0.005×V反总÷(500÷V提取×V样)÷T=1.334×ΔA

V反总:反应总体积,0.2mL;V样:加入的样本体积,0.02mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量, g;V提取:提取液体积,1mL;500:500万个细胞;T:反应时间,3min。

注意事项:

当ΔA大于0.2或者A1大于1.5时,建议将样本用蒸馏水稀释后测量;ΔA过小时,建议增加酶促反应时间(5min      或10min)或增加加入的样本体积来测定。(计算时注意同步修改计算公式)


上一篇:酪氨酸酶活性检测试剂盒-酪氨酸酶试剂盒-上海液质
下一篇:可溶性果胶(WSP)含量检测试剂盒-可溶性果胶(WSP)检测试剂盒-上海液质

独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到

咨询热线
400-998-2324
欢迎关注官方微信
版权所有:上海液质检测技术有限公司    网站备案号:沪ICP备2022005945号
400-998-2324
0.050112s