酪氨酸酶活性检测试剂盒-酪氨酸酶试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4453 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4452 规格:50T/24S 可见分光光度法
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 110 mL×1

4℃保存

试剂一

粉剂×3

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:临用前每瓶加入 16 mL 提取液充分溶解待用,现配现用。溶解后易氧化,24h 要尽快用完。

产品说明:

酪氨酸酶(tyrosinase:EC1.14.18.1)是一种单酚单加氧酶,是具有双功能的含铜糖蛋白,广泛存在于植物、酵母和动物组织中。酪氨酸酶是生物体合成黑色素的关键酶,也是引起果蔬酶促褐变的主要因素,同时也对昆虫的免疫及生长有重要影响

酪氨酸酶催化L-多巴生成多巴色素,其在475nm下有特征吸收峰,进而测定出酪氨酸酶的活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、细胞超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心 20min,取上清,置冰上待测。

2、细胞或细菌样本的制备:先收集细胞或细菌样本到离心管内,弃上清,按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。12000g,4℃离心 20min,取上清, 置冰上待测

3、血清(浆):直接检测。若有浑浊则离心后去上清使用。


二、测定步骤

1 分光光度计预热30min,波长调至475nm。蒸馏水调零。

2 加样表(在1mL玻璃比色皿中分别加入)

试剂名称(μL

测定管

试剂一

900

样本

100

 将上述试剂分别加入比色皿后迅速吹打混匀,记录第 10s 的吸光值 A1,迅速置于 37℃(哺乳动物)或 25℃

(其他物种)水浴或培养箱中 3min,拿出迅速擦干测定 3min10s 时的吸光值 A2,计算ΔA =A2 -A1。

三、酪氨酸酶酶活计算

1、按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化生成1nmol多巴色素的酶量定义为一个酶活性单位。   酪氨酸酶(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总×109÷(V样×Cpr)÷T=90.09×ΔA÷Cpr

2、按样本质量计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化生成1nmol多巴色素的酶量定义为一个酶活性单位。  酪氨酸酶(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×V反总×109÷(W÷V提取×V样)÷T=90.09×ΔA÷W

3、按细胞或细菌数量计算:

单位的定义:每104个细胞或细菌每分钟催化生成1nmol多巴色素的酶量定义为一个酶活性单位。   酪氨酸酶(U/104 cell)=ΔA÷(ε×d)×V反总×109÷(500÷V提取×V样)÷T=0.18×ΔA

4、按血清(浆)体积计算:

单位的定义:每mL血清(浆)每分钟催化生成1nmol多巴色素的酶量定义为一个酶活性单位。   酪氨酸酶(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×V反总×109÷V样÷T=90.09×ΔA

V反总:反应总体积,10-3L;ε:多巴色素的摩尔消光系数:3.7×104L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;109 单位换算系数,1mol=109nmol;V样:加入的样本体积,0.1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g    V提取:提取液体积,1mL;500:细胞或细菌总数,500万;T:反应时间,3min。

注意事项:

1. 当ΔA大于0.3时,建议将样本用提取液稀释后测量;ΔA过小时,建议增加酶促反应时间(5min或10min)或增   加加入的样本体积来测定。计算时注意同步修改计算公式。


上一篇:离子结合型果胶(ISP)含量检测试剂盒-离子结合型果胶(ISP)检测试剂盒-上海液质
下一篇:酪氨酸解氨酶(TAL)活性检测试剂盒-酪氨酸解氨酶(TAL)试剂盒-上海液质

独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到

咨询热线
400-998-2324
欢迎关注官方微信
版权所有:上海液质检测技术有限公司    网站备案号:沪ICP备2022005945号
400-998-2324
0.048428s