上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前取 1 瓶试剂二A 加入 8 mL 试剂一，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后加入 1 支试剂二 B 和 1 支试剂二 C 混合溶解，这样可以分两批配制并且测定，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融。

2、 试剂三：临用前取 1 瓶试剂三 B 加入 5mL 试剂三 A 溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融。

3、 试剂四：临用前先离心，取 12.5 μL 试剂四加入 4 mL 溶解好的试剂三混合备用（约 53T），现用现配，也可根据样本量按比例配制。

4、 试剂五：临用前取 1 瓶试剂五 B 加入 8mL 试剂五 A 和 1 支试剂五 C 溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融。

5、 试剂六：临用前取 1 支加入 208 μL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融。

6、 试剂七：临用前加入 2mL 蒸馏水，用不完的试剂-20℃分装保存 8 周，避免反复冻融。

产品说明：

SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。SSS 催化ADPG 与淀粉引物（葡聚糖）反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成 ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+还原为 NADPH，NADPH 生成量与前一步反应中ADP 生成量呈正比，340nm 下测定 NADPH 增加量即可计算 SSS 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

粗酶液制备：称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，紫外分光光度计蒸馏水调零。

2. 样本测定：在EP管内按顺序加入

混匀后立即取出 200μL 于微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中在 340nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，计算ΔA=A2-A1。

注意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。

三、SSS 活性计算

    a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1、按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

SSS 活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V 测]÷(Cpr×V 样÷V 反总×V 上清) ÷T=43.2×ΔA÷Cpr