上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加入 2 mL 蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂-20℃分装避光保存；

2、 试剂六：临用前加入 10mL 70%乙醇溶液（V/V）溶解；

3、 标准品：临用前配制，加入 1.136 mL  提取液充分溶解；吸取 0.02 mL  上述溶液，加入 0.98 mL  提取液， 混匀，即 1000 nmol/mL AsA 标准溶液。

产品说明:

抗坏血酸（AsA）是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物 细胞中最重要的抗氧化剂，AsA 在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。脱氢抗坏血酸（DHA）是 AsA 的可逆的氧化型，在生物体内，与抗坏血酸共同组成氧化还原系统， 具有电子受体作用。

AsA 具有还原性，能将 Fe3+还原成 Fe2+，Fe2+与 2,2’-联吡啶形成粉红色络合物，在 525nm 处有特征性吸收峰。DTT 可还原 DHA 生成 AsA，可用于检测样本总抗坏血酸（AsA+DHA）含量。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

研钵/匀浆器、冰、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液器、乙醇和蒸馏水。

操作步骤：

一、 样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）: 提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1 mL 提取液） 进行冰浴匀浆。13000g，4℃离心 10 min，取上清置冰上待测。

2. 细胞或细菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000 : 1 的比例（建议 500 万细胞加入 1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300   W，超声 3  秒，间隔 7  秒，总时间 3   min）；13000g，4℃离心 10 min，取上清液置冰上混匀待测。

3. 血清等液体：取 500 μL 样本，加入 500 μL 提取液，漩涡混匀。13000g，4℃离心 10 min，取上清置冰上待测。

二、 测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 525 nm，蒸馏水调零。

2. AsA 含量测定

三、AsA /T-AsA 含量计算公式

DHA (nmol/g  质量) = 1000×（ΔA₂ 测定管÷ΔA₂ 标准管-ΔA₁ 测定管÷ΔA₁ 标准管）÷W

（2） 按细胞数量计算

DHA (nmol/104 cell) =1000×（ΔA₂ 测定管÷ΔA₂ 标准管-ΔA₁ 测定管÷ΔA₁ 标准管）÷ 细胞数量

（3） 按液体体积计算

DHA (nmol/mL) =2000×（ΔA₂ 测定管÷ΔA₂ 标准管-ΔA₁ 测定管÷ΔA₁ 标准管）

注意事项：

1. 加入试剂七时将枪头伸入液面以下加入，不可悬空滴加，否则会导致液体浑浊。

2. 空白管 1、空白管 2 及标准管只需测定 1-2 次。

3. A 大于 1.5 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定，并在计算时乘以相应的稀释倍数。

4. 本试剂盒可单独用于检测样本中 AsA 或 T-AsA 含量，也可在同时检测 AsA 与 T-AsA 含量后计算 DHA 含量。

5.样本提取后当天检测。