上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加 2.5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融。

2、 试剂三：临用前加 2.5 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融。

3、 试剂四：临用前取 1 支加入 0.3mL 蒸馏水溶解，4℃保存一周。（1 支溶解后可做 100T，为了延长使用时间， 此产品多给 1 支粉剂）

4、 试剂五：临用前加入 0.3 mL 蒸馏水溶解，-20℃分装保存两周，禁止反复冻融。

5、 试剂六：临用前加入 0.3 mL 蒸馏水溶解，4℃保存一周，也可按比例现用现配。

产品说明：

焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（PFP，EC2.7.1.90）是一种胞质酶，广泛存在于植物组织中，与磷酸果糖激酶一样催化果糖-6-磷酸的磷酸化，单 PEP 催化反应为可逆反应，并以焦磷酸代替 ATP，在光合作用碳代谢中起重要作用。

PFP 催化 6-磷酸果糖转化为 1,6-二磷酸果糖，它在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作用下转变为磷酸二羟丙酮， 再由 α-磷酸甘油脱氢酶和 NADH 催化生成 3-二磷酸甘油和 NAD，340nm 处的吸光度变化反映了 PFP 的活性的高低。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP 管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1 g，加入 1 mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，20000g 离心 15min，取上清置冰上待测；

2、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 s，间隔 7 s，总时间 3 min）；然后 4℃，20000g 离心 15min，取上清置冰上待测；

3、液体：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 340 nm，蒸馏水调零。

2、 操作表：

三、焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶活性的计算

1、按微量石英比色皿计算：

           （1） 按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。PFP（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷(V 样×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr

（2） 按照样本质量计算

酶活单位定义：每克组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。PFP（U /g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷(W×V 样÷V 提取) ÷T=53.59×ΔA÷W

（3） 按照细胞数量计算

酶活单位定义：每 104 个细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

PFP（U /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷(V 样×细胞数量÷V 提取) ÷T=53.59×ΔA÷细胞数量

（4） 按照液体体积计算

酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。PFP（U /mL）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷V 样÷T=53.59×ΔA