溶液的配制：

1、 标准品：10mg 木糖。临用前加入 667μL 蒸馏水配制成 100μmol/mL 的木糖标准液，2-8℃保存两周。

 产品说明：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，碱性木聚糖酶（BAX）一般分离自最适生长pH为9-11的微生物。

BAX在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm 吸光值增加速率，可计算BAX活力。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检10：样本稀释倍数，10倍；C标准：木糖标准溶液浓度，2μmol/mL；V提取：加入缓冲液体积，1mL；W2： 样本质量，g；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样本：加入的样本量，0.2mL。

需自备的仪器和用品：

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、发酵液：发酵液于 8000rpm，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样本。

2、组织样本：称约 0.1g 组织，加入 1mL 缓冲液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，离心 15min，取上清蒸馏水稀释 10 倍待测。

3、酶干粉：称约 1mg，加 1mL 缓冲液溶解，蒸馏水稀释 10 倍待测。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、 标准溶液的制备：取 20μL 100μmol/mL 的木糖标准液，加入 980μL 蒸馏水，充分混匀，配制成 2μmol/mL 的标准溶液使用，现用现配。（实验中每管需要 200μL，为减小实验误差，故配制大体积）。

3、 样本测定（在EP管中加入下列试剂）

三、BAX计算公式

1. 发酵液BAX活力计算：

酶活定义：50℃，pH 9.0条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力（U/mL）=C标准×ΔA测定÷ΔA标准÷T=0.067×ΔA测定÷ΔA标准C标准：木糖标准溶液浓度，2μmol/mL；T：反应时间，30min。

2. 酶干粉BAX活力计算：

酶活定义：50℃，pH 9.0条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力（U/mg 质量）= 10×C 标准×ΔA测定÷ΔA标准×V 提取÷W1÷T= 0.67×ΔA测定÷ΔA标准÷W1

10：样本稀释倍数，10倍；C标准：木糖标准溶液浓度，2μmol/mL；V提取：加入缓冲液体积，1mL；W1： 酶干粉重量，mg；T：反应时间，30min。

3. 组织中BAX活力计算：

（1） 按样本蛋白浓度计算：

酶活定义：50℃，pH 9.0条件下，每mg组织蛋白每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。

BAX活力（U/mg prot）= 10×C 标准×ΔA测定÷ΔA标准×V 样本÷(V 样本×Cpr)÷T=0.67×ΔA测定÷ΔA标准÷ Cpr

（2） 按样本质量计算：

酶活定义：50℃，pH 9.0条件下，每克组织每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。