上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

溶液的配制：

1、 试剂三：临用前根据样本量用试剂二稀释 5 倍后备用。用不完的试剂 2-8℃可保存 1 周。

2、 标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠。

产品说明：

XOD（EC  1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心、肺、肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中， 对肝损害的诊断具有特异性的意义。

XOD催化次黄嘌呤产生黄嘌呤和超氧阴离子，超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-，NO -在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下，生成紫红色的偶氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根据其生成量可反映XOD活性的大小。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、匀浆器/研钵、细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（ 104  个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3. 血清（浆）样本等其他液体：直接检测。若有沉淀，离心后测定。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。

2、 标准液的稀释：将标准液用蒸馏水稀释至0.25μmol/mL（可以吸取25μL 10μmol/mL 亚硝酸钠和975μL蒸馏水混合）。实验中每个标准管需50µL 标准溶液。

3、 操作表

三、XOD 活性计算

            （1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NO2-定义为一个酶活力单位。XOD活性（U/mg prot）=（∆A样本÷∆A标准×C 标）×10 3 ×V样÷（Cpr×V样）÷T×F= 12.5×∆A样本÷∆A标准÷Cpr×F

（2） 按样本质量计算：

单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol NO2-定义为一个酶活力单位。XOD活性（U/g 质量）=（∆A样本÷∆A标准×C 标）×V 提取×10 3 ÷W÷T×F= 12.5×∆A样本÷∆A标准÷W×F

（3） 按细菌或细胞数量计算：

单位的定义：每万个细胞每分钟催化产生1nmol NO2-定义为一个酶活力单位。XOD活性（U/104 cell）=（∆A样本÷∆A标准×C 标）×V 提取×10 3 ÷500÷T×F= 0.025×∆A样本÷∆A标准×F

（4） 按液体体积计算：