黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒-黄嘌呤氧化酶(XOD)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4541 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4540 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 75 mL×1 

2-8℃保存

试剂二

液体 15 mL×1 

2-8℃保存

试剂三

液体 3.5mL×1 

2-8℃保存

试剂四

液体 15 mL×1 

2-8℃保存

试剂五

液体 25mL×1 

2-8℃保存

试剂六

液体 25 mL×1 

2-8℃保存

标准品

液体 1mL×1 

2-8℃保存

溶液的配制:

1 试剂三:临用前根据样本量用试剂二稀释 5 倍后备用。用不完的试剂 2-8℃可保存 1 周。

2 标准品:10μmol/mL 亚硝酸钠。

产品说明:

XOD(EC  1.17.3.2)催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子,是活性氧主要来源之一;同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心、肺、肝脏等组织中,当肝功能受损时,XOD大量释放到血清中, 对肝损害的诊断具有特异性的意义。

XOD催化次黄嘌呤产生黄嘌呤和超氧阴离子,超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2-NO -在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下,生成紫红色的偶氮化合物,在530nm有特征吸收峰,根据其生成量可反映XOD活性的大小。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、匀浆器/研钵、细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1. 细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量( 104  个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

3. 血清(浆)样本等其他液体:直接检测。若有沉淀,离心后测定。

二、测定步骤

1 分光光度计预热30min以上,调节波长至530nm,蒸馏水调零。

2 标准液的稀释:将标准液用蒸馏水稀释至0.25μmol/mL(可以吸取25μL 10μmol/mL 亚硝酸钠和975μL蒸馏水混合)。实验中每个标准管需50µL 标准溶液。

3 操作表

试剂名称(μL

空白管

测定管

标准管

蒸馏水

50

-

-

上清液

-

50

-

标准液

-

-

50

试剂一

200

200

200

试剂三

200

200

200

试剂四

200

200

200

混匀,37℃水浴/恒温培养箱放置 20min

试剂五

300

300

300

试剂六

300

300

300

混匀,37℃水浴/恒温培养箱放置 20min,于 1mL 玻璃比色皿中,测定 530nm 处吸光值,计算∆A 标准

=A 标准管-A 空白管,∆A 样本=A 测定管-A 空白管。空白管和标准曲线只需做 1-2 次。 注:∆A 样本在 0.005-1 之间数值有效,数值过大或过小,可以稀释或者增加样本量。

三、XOD 活性计算

            (1) 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol NO2-定义为一个酶活力单位。XOD活性(U/mg prot)=(∆A样本÷∆A标准×C 标)×10 3 ×V样÷(Cpr×V样)÷T×F= 12.5×∆A样本÷∆A标准÷Cpr×F

(2) 按样本质量计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化产生1nmol NO2-定义为一个酶活力单位。XOD活性(U/g 质量)=(∆A样本÷∆A标准×C 标)×V 提取×10 3 ÷W÷T×F= 12.5×∆A样本÷∆A标准÷W×F

(3) 按细菌或细胞数量计算:

单位的定义:每万个细胞每分钟催化产生1nmol NO2-定义为一个酶活力单位。XOD活性(U/104 cell)=(∆A样本÷∆A标准×C 标)×V 提取×10 3 ÷500÷T×F= 0.025×∆A样本÷∆A标准×F

(4) 按液体体积计算:

单位的定义:每毫升液体每分钟催化产生1nmol NO -定义为一个酶活力单位。

XOD活性(U/mL)=(∆A样本÷∆A标准×C 标)×10 3÷T ×F= 12.5×∆A样本÷∆A标准×F

C标:标准溶液浓度:0.25μmol/mL;103:单位换算系数,1μmol/mL=103nmol/mL;T:反应时间,20min W:样本质量,g;V提取:试剂一体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL 500:细胞或细菌总数,500万; F:稀释倍数。


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