上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
| 货号：UPLC-MS-4298 | 规格：100T/48S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-4297 | 规格：50T/24S |
紫外分光光度法 |
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液 |
液体 50 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂一 |
液体 25 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×2 支 |
2-8℃保存 |
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试剂三 |
粉剂×1 瓶 |
-20℃保存 |
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试剂四 |
液体 1 mL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 提取液：内含不溶物，使用前摇匀。
2、 试剂二：临用前加入 1mL 蒸馏水备用，-20℃可分装保存 4 周，避免反复冻融。
3、 试剂三：粉剂置于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入 1 mL 乙醇和 1 mL 蒸馏水混匀溶解备用。可以分装后-20℃保存 4 周，避免反复冻融。
花青素还原酶（ANR）是原花青素生物合成途径中的关键酶，使花色素转变为相应的顺式黄烷-3-醇，在植物 体内起着非常重要的调控作用。
NADPH在ANR作用下将花色素转化为黄烷-3-醇和NADP，在340nm下测定NADPH的减少速率，即可反映ANR活性。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、 乙醇、冰和蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 15 分钟，取上清，置冰上待测。
2、细胞或细菌样本的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。12000g，4℃离心 15min，取上清， 置冰上待测。
2、 加样表：
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试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
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试剂一 |
170 |
170 |
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试剂二 |
10 |
10 |
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试剂三 |
5 |
5 |
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样本 |
10 |
- |
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上述试剂混匀后37℃水浴反应30min。 |
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试剂四 |
5 |
5 |
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样本 |
- |
10 |
混匀后测量测定管和对照管在 340nm 下的吸光度，分别记为 A 测定管、A 对照管，计算ΔA=A 对照管-A 测定管。
A、按微量石英比色皿计算：
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟减少1nmol NADPH的酶量定义为一个酶活性单位。ANR酶活（U/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×109×V反总]÷(V样×Cpr)÷T=107.18×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟减少1nmol NADPH的酶量定义为一个酶活性单位。ANR酶活（U/g 质量）=[ΔA÷(ε×d) ×109×V反总]÷(W÷V提取×V样)÷T=107.18×ΔA÷W
3、按细胞或细菌个数计算：
单位的定义：每104个细胞或细菌在反应体系中每分钟减少1nmol NADPH的酶量定义为一个酶活性单位。ANR酶活（U/104 cell）=[ΔA÷(ε×d) ×109×V反总]÷(500÷V提取×V样)÷T=0.2144×ΔA
V反总：反应总体积，2×10-4L；ε：NADPH的摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样： 加入的样本体积，0.01mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V提取：提取液体积，1mL；500： 500万个细胞；T：反应时间，30min；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔UV板光径）进行计算即可。
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