琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒-琥珀酸脱氢酶(SDH)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4333 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4332 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 60 mL×1

-20℃保存

试剂二

液体 0.6 mL×1

-20℃保存

试剂三

液体 5 mL×1

4℃保存

试剂四

粉剂×1

4℃保存

试剂五

粉剂×1

4℃保存

试剂六

粉剂×1

-20℃保存

溶液的配制:

1 试剂四:临用前加入到试剂三中溶解待用;

2 试剂五:临用前加入 4 mL 双蒸水,用不完的试剂仍 4℃保存;

3 试剂六:临用前加入 3.333 mL 双蒸水,用不完的试剂 4℃保存。

产品说明:

SDH(EC 1.3.5.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶,位于线粒体内膜上的一种膜结合酶,是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外,为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸(PMS)传递还原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm处具有特征吸收峰,通过600nm吸光度的变化,测定2,6-DCPIP的还原速度,代表SDH酶活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10μL 试剂二,用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨,4 ℃ 11000g 离心 10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1 分光光度计预热30min以上,调节波长至600nm,蒸馏水调零。

2 样本测定:

试剂名称(μL

测定管

空白管

试剂三

60

60

试剂五

60

60

蒸馏水

800

800

37℃(哺乳动物)25℃(其它物种)保温10min左右

样本

30

 

蒸馏水

 

30

试剂六

30

30

依次加各试剂到1mL 比色皿中,在加入试剂六的同时开始计时;在600nm 波长下记录20 秒时的初始吸光度A1 比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入 37℃(哺乳动物) 25℃(其它物种)水浴中,准确反应 1 分钟;迅速取出比色皿并擦干,600nm 下比色,记录 1 20 秒时的吸光度 A2,计算 ΔA=A1-A2,得到 ΔA 测定、ΔA 空白。

三、SDH 活性的计算

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。SDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样) ÷T=1555.556×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr

(2) 按样本质量计算

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。SDH活性(U/g 质量)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W) ÷T=1571.111×(ΔA测定-ΔA空白)÷W

(3) 按细菌或细胞数量计算

单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定义为一个酶活性单位。SDH活性(U/104 cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500) ÷T=3.142×(ΔA测定-ΔA空白)

V反总:反应体系总体积,0.98×10-3L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数,21×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm; V样:加入样本体积,0.03mL;V样总:加入试剂一和试剂二体积,1.01mL;T:反应时间,1min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万;109:单位换算系数,1mol=109nmol。

注意事项:

1 测定过程中所有试剂和样本在冰上放置,以免变性失活。

2 ΔA大于0.5,需将酶液用酶提取液稀释,使ΔA小于0.5,可提高检测灵敏度。

3 由于提取液中含有一定浓度的蛋白(约1mg/mL),所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。


上一篇:花青素还原酶(ANR)活性检测试剂盒-花青素还原酶(ANR)试剂盒-上海液质
下一篇:海藻糖酶(THL)活性检测试剂盒-海藻糖酶(THL)试剂盒-上海液质

独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到

咨询热线
400-998-2324
欢迎关注官方微信
版权所有:上海液质检测技术有限公司    网站备案号:沪ICP备2022005945号
400-998-2324
0.049014s