海藻糖含量检测试剂盒-海藻糖检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4113 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4112 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。


试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 50 mL×1

2-8℃保存

试剂一

粉剂×2

2-8℃保存

标准品

粉剂×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、标准品:10 mg 海藻糖。临用前加 1 mL 蒸馏水,溶液浓度为 10 mg/mL,2-8℃保存两周;

2、工作液的配制:临用前取 1 瓶试剂一中加入 8 mL 蒸馏水后,缓慢加入 32 mL 浓硫酸,不断搅拌,充分溶解,待用。用不完的试剂 2-8℃保存一周,试剂颜色变深后则不可以再使用。

产品说明:

海藻糖存在于大量有机体中,包括细菌、藻类、酵母、植物、昆虫和其他无脊椎动物。由于海藻糖具有独特的不同于其他碳水化合物的生物学特性,能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。

测定方法采用蒽酮比色法。具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样本的测定等优点。但是蒽酮比色法也存在一定缺陷,如果样本中含有可溶性糖,则会影响测定。本试剂盒建议用于除海藻糖外不含其他可溶性糖样本的测定。

技术指标:

最低检出限:0.0016 mg/mL

线性范围:0.003125-0.1 mg/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机,可调式移液器、超声破碎仪、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、浓硫酸和蒸馏水。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1 细菌或细胞处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液, 超声波破碎细菌或细胞(功率 200w,超声秒,间隔 10 秒,重复 30 次),室温静置 45min,振荡 3~5 次, 冷却后,8000g,常温离心 10min,取上清。

2 组织的处理:称取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液,冰浴匀浆或研碎,室温静置 45min,振荡 3~5 次,冷却后,8000g,常温离心 10min,取上清。

3 血清(浆)的处理:吸取约 100μL 血清(浆),加入 0.9mL 提取液,充分混匀,室温静置 45min,振荡 3~5次,冷却后,8000g,常温离心 10min,取上清。

二、测定步骤

1 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 620nm,蒸馏水调零。

2 调节水浴锅至 95℃。

3 标准品的准备:将标准品用蒸馏水稀释到 0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0mg/mL。

4 标准品稀释表

序号

稀释前浓度mg/mL

标准液体积µL

蒸馏水体积(µL

稀释后浓度(mg/mL

1

10

150

1350

1

2

1

500

500

0.1

3

0.1

500

500

0.05

4

0.05

500

500

0.025

5

0.025

500

500

0.0125

6

0.0125

500

500

0.00625

7

0.00625

500

500

0.003125

8

-

0

500

0(即空白管)

实验中每个标准管需 0.25mL 标准溶液。

5 标准曲线的建立:取 0.25mL 标准液和 1mL 工作液至 EP 管中,95℃水浴 10min(盖紧,防止水分散失),自然冷却至室温,取 1mL 至比色皿中,在 620nm 处测吸光值 A。ΔA 标准=A 标准-A 空白,根据标准管的浓度

(x,mg/mL)和吸光度 ΔA 标准(y,ΔA 标准),建立标准曲线。

6 样本测定:取 0.25mL 样本和 1mL 工作液至 EP 管中,95℃水浴 10min(盖紧,防止水分散失),自然冷却至室温,取 1mL 至比色皿中,在 620nm 处测吸光值A。

三、海藻糖含量计算

1 根据标准曲线,将 ΔA 测定(y A 测定)带入公式计算样本浓度(x,mg/mL)。

2 按样本质量计算:

海藻糖含量(mg/g 质量)= V1×x÷(W×V1÷V2)=x ÷W 3 按样本蛋白浓度计算:

海藻糖含量(mg/mg prot)=V1×x÷(V1×Cpr)=x÷Cpr 4 按细菌或细胞数量计算:

海藻糖含量(μg/104 cell)=(1000×V1×x )÷(500 ×V1÷V2) =2x 5 按血清(浆)体积含量计算:

海藻糖含量(mg/mL)=(V1×x)÷(V3×V1÷ V2)=10x

1000:单位换算系数,1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.25mL;V2:提取液总体积,

1mL;V3:加入血清(浆)体积,0.1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。

注意事项: 

如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。计算时注意同步修改计算公式。


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