| 货号：UPLC-MS-5022 | 规格：100T/48S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-5021 | 规格：50T/24S | 可见分光光度法 |
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液 |
液体 30 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂一 |
液体 7mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂三 |
液体 30 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂四 |
液体 30 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前先加入 14 mL 蒸馏水，震荡使其充分溶解（若溶解后的试剂中有黑色颗粒物，可离心后取上清使用），用不完的试剂 4℃保存 2 周。
2、 工作液的配制：临用前将试剂三和试剂四 1:1 等体积混合，根据样本实际所需用量现配现用。
3、 标准品：临用前加入 1 mL 蒸馏水配制成 50 μmol/mL 的麦芽糖标准溶液，用不完的试剂 4℃保存 2 周。然后用蒸馏水 16 倍稀释成 3.125 μmol/mL 的麦芽糖标准溶液（建议吸取 25μL 50μmol/mL 麦芽糖标准溶液，加入 375μL 蒸馏水中，充分混匀）待测。
产品说明：
海藻糖是功能性低聚糖，具有非还原性、保湿性、热酸稳定性、抗冻结性等特性，是细胞在不良环境条件下产生的一种重要的抗逆应激物之一，它对生物大分子和生物组织有着非特异性的保护作用。
海藻糖合成酶（Trehalose Synthase，TS）能催化麦芽糖生成海藻糖，是海藻糖生物合成的关键途径之一。本试剂盒使用糖化酶分解剩余麦芽糖为葡萄糖，通过葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量，按照麦芽糖减少的量表示海藻糖合成酶的活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、低温离心机、恒温水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器、蒸馏水。
1、 分光光度计预热30 min以上，调节波长至505 nm，蒸馏水调零。
2、 在EP管中进行如下操作：
（1） 酶促反应
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加入试剂（μL） |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
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样本 |
100 |
100 |
- |
- |
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试剂一 |
- |
100 |
- |
- |
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标准溶液 |
- |
- |
100 |
- |
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蒸馏水 |
- |
- |
100 |
200 |
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充分混匀，35℃水浴反应2 h，沸水浴5 min终止反应，冷却至室温。 |
- |
- |
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试剂一 |
100 |
- |
- |
- |
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试剂二 |
200 |
200 |
200 |
200 |
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混匀，40℃过夜反应（12 h以上），沸水浴5 min终止反应，冷却至室温。10000 g ，25℃离心10 min， 取上清待测。 |
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加入试剂（μL） |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
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上清液 |
100 |
100 |
100 |
100 |
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工作液 |
900 |
900 |
900 |
900 |
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充分混匀，37℃反应30 min，于1 mL玻璃比色皿中测定505 nm处的吸光值，分别记为A对照、A测定、A标准与A空白，ΔA测定=A对照-A测定、ΔA标准=A标准-A空白。 |
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注：空白管和标准管只需测 1~2 次。
三、酶活性计算
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化1 nmol 麦芽糖生成1 nmol 海藻糖定义为一个酶活力单位。
TS酶活（U/mg prot）= C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷（V样×Cpr ）÷T×F÷2
=13.02×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr×F
2、按样本质量计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化1 nmol 麦芽糖生成1 nmol 海藻糖定义为一个酶活力单位。
TS酶活（U/g 质量）= C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷（V样÷V 样总×W）÷T×F÷2
=13.02×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F
3、按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每104个细菌或细胞每分钟催化1 nmol 麦芽糖生成1 nmol 海藻糖定义为一个酶活力单位。
TS酶活（U/104 cell）= C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样÷（V样÷V 样总×cell ）÷T×F÷2
=13.02×ΔA测定÷ΔA标准÷cell×F
C标：标准管浓度，3.125 μmol/mL=3.125×10 3 nmol/mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；V样：加入样本体积，0.1 mL；T：反应时间，120 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；cell：细胞或细菌总数， 以万计；F：稀释倍数； 2：1分子麦芽糖可转化为2分子葡萄糖。
注意事项：
1、 当吸光值大于 1.5 或者 ΔA 测定大于 1 时，建议将样本用蒸馏水稀释后测量。计算公式注意乘以稀释倍数。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到
