还原糖含量检测试剂盒-还原糖检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4107 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4106 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 60 mL×1

2-8℃保存

试剂二

液体 25mL×1

2-8℃保存

标准品

粉剂×1

2-8℃保存

溶液的配制:标准品:10 mg 无水葡萄糖(干燥失重<0.2%)。临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解备用,2-8℃保存 2 周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。

产品说明:

还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等, 是最常见的单糖和双糖,其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物,也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。

加热促进碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物,在 540nm 有特征吸收峰;在一定的浓度范围内,还原糖含量与 540nm 吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可求出样本中还原糖的含量。

技术指标:

最低检出限:0.0487 mg/mL

线性范围:0.05-0.25 mg/mL


注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、离心机,可调式移液器、超声破碎仪,1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。


操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1. 细菌或细胞的处理:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一(mL) 500~1000:1 的比例(建议 1000 万细菌或细胞加入 2mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴, 功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30  次);转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次,8000g,常温离心 10min,取上清供测定用。

2. 组织的处理:按照组织质量(g):试剂一体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.2g 组织加入 2mL 试剂一),冰浴匀浆。转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min 并且振 8~10 次,8000g,常温离心 10min,取上清供测定用。

3. 血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL):试剂一体积(mL) 1:5~10 的比例(建议取约 0.2mL 血清(浆)加入 1.8mL  试剂一),冰浴匀浆。转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min并且振荡 8~10 次,8000g,常温离心 10min,取上清供测定用。

二、测定步骤


1. 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。

2. 标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至 0.25、0.2、0.15、0.1、0.05 mg/mL。

3. 标准品稀释表

序号

稀释前浓度(mg/mL

标准液体积(µL

蒸馏水体积(µL

稀释后浓度mg/mL

1

10

100

900

1

2

1

250

750

0.25

3

1

200

800

0.2

4

1

150

850

0.15

5

1

100

900

0.1

6

1

50

950

0.05

实验中每个标准管需 700µL 标准溶液

4.  EP 管中加入下列试剂:

试剂(μL

对照管

测定管

标准管

空白管

样本

700

700

 

 

标准品

 

 

700

 

试剂二

 

500

500

500

蒸馏水

500

 

 

700

混合均匀,在沸水浴加热 5min(盖紧,防止水分散失),取出后立即冷却至室温,混匀。取 1mL 至玻璃比色皿中,在 540nm 波长下读取标准管、对照管、测定管和空白管吸光值。计算 ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。空白管和标准曲线只需做 1-2 次。

三、还原糖含量计算

1、标准曲线的建立:

根据标准管的浓度(y,mg/mL)和吸光度 ΔA  标准(x,ΔA  标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将 ΔA

测定(x,ΔA 测定)带入公式计算样本浓度(y,mg/mL)。

2、按样本质量计算:

还原糖(μg/g 质量)=1000×y×V1÷W=200 0×y÷W 3、按样本蛋白浓度计算:

还原糖(μg/mg prot)= 1000×y×V1÷(V1×Cpr )= 1000× y÷Cpr 4、按细菌或细胞数量计算:

还原糖(μg /104 cell)= 1000×y×V1÷ 1000=2×y 5、按血清(浆)体积计算:

还原糖(μg/mL)=1000×y×V2÷V3=10000×y

1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入试剂一体积,2mL;V2:加入血清(浆)和试剂一总体积,2mL;V3:

加入血清(浆)体积,0.2mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;1000:细菌或细胞数量,1000 万。

注意事项:

1. 每个测定管需设定一个对照管。

2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。



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